浅野　竜太郎ASANO Ryutaroアサノ　リュウタロウ

業績情報

氏名・連絡先

• 氏名

  アサノ　リュウタロウ, 浅野　竜太郎, ASANO Ryutaro

• 生年

  1976

• 個人ホームページ

  http://www.tenure-track-tuat.org/tenure/technology/post_69.html

主たる所属・職名

• グローバルイノベーション研究院, 教授

その他の所属

• 工学研究院　生命機能科学部門
• 工学府　生命工学専攻
• 工学部　生命工学科

経歴

• 東北大学
  加齢医学研究所附属医用細胞資源センター
  助手
  自 2000年04月, 至 2002年11月
• 東北大学
  大学院工学研究科バイオ工学専攻
  助手
  自 2002年12月, 至 2007年03月
• 東北大学
  加齢医学研究所附属医用細胞資源センター
  助手(兼任)
  自 2003年02月, 至 2005年03月
• 東北大学
  大学院工学研究科バイオ工学専攻
  助教
  自 2007年04月, 至 2010年12月
• 東北大学
  大学院工学研究科バイオ工学専攻
  准教授
  自 2011年01月, 至 2015年08月
• 東京農工大学
  大学院工学研究院生命機能科学部門
  准教授
  自 2015年09月

学歴

• 東北大学
  工学部
• 東北大学
  工学部生物化学工学科
  至 1999年03月, 卒業
• 東北大学
  大学院工学研究科生物工学専攻
  至 2000年03月, 中退, 博士前期

研究分野

• A189　ライフサイエンス, A90110　生体医工学
• A689　ものづくり技術（機械・電気電子・化学工学）, A27040　バイオ機能応用、バイオプロセス工学
• A189　ライフサイエンス, A50020　腫瘍診断、治療学

研究キーワード

• 抗体工学
• タンパク質工学
• イムノセンシング

科学研究費助成事業

• 挑戦的研究（萌芽）
  高生産性細菌創製に向けた膜透過性ペプチドを基盤とした革新的な形質転換技術の開発
  自 2022年, 至 2022年
• 国際共同研究加速基金（国際共同研究強化(B)）
  骨転移性がんの移動・浸潤におけるコラーゲン代謝の解明と治療薬創出
  自 2022年, 至 2022年
• 基盤研究(B)
  高活性二重特異性抗体の創製に資する至適な抗原配置の先端的構造解析による描像
  自 2022年, 至 2022年
• 挑戦的研究（開拓）
  クライオ電子顕微鏡解析に基づく酵素―電極間直接電子移動制御型センサの開発
  自 2021年, 至 2024年
• 国際共同研究加速基金（国際共同研究強化(B)）
  骨転移性がんの移動・浸潤におけるコラーゲン代謝の解明と治療薬創出
  自 2021年, 至 2021年
• 基盤研究(B)
  次世代抗体設計に資するマルチスケール解析による二重特異性抗体の超活性化機構の理解
  自 2021年, 至 2021年
• 挑戦的研究（萌芽）
  高生産性細菌創製に向けた膜透過性ペプチドを基盤とした革新的な形質転換技術の開発
  自 2021年, 至 2021年
• 基盤研究(B)
  機能性タンパク質ナノブロック複合体創製の基盤的プロセス技術開発と応用展開
  自 2021年, 至 2021年
• 基盤研究(B)
  二重特異性がん治療抗体の革新的プロドラッグ化デザインの開発
  自 2020年, 至 2022年
• 基盤研究(B)
  機能性タンパク質ナノブロック複合体創製の基盤的プロセス技術開発と応用展開
  自 2020年, 至 2020年
• 基盤研究(B)
  次世代抗体設計に資するマルチスケール解析による二重特異性抗体の超活性化機構の理解
  自 2020年, 至 2020年
• 国際共同研究加速基金（国際共同研究強化(B)）
  骨転移性がんの移動・浸潤におけるコラーゲン代謝の解明と治療薬創出
  自 2020年, 至 2020年
• 基盤研究(C)
  緑色蛍光タンパク質結合一本鎖人工抗体を用いた癌可視化システムの構築および臨床応用
  自 2019年, 至 2019年
• 国際共同研究加速基金（国際共同研究強化(B)）
  骨転移性がんの移動・浸潤におけるコラーゲン代謝の解明と治療薬創出
  自 2019年, 至 2019年
• 基盤研究(B)
  次世代抗体設計に資するマルチスケール解析による二重特異性抗体の超活性化機構の理解
  自 2019年, 至 2019年
• 基盤研究(C)
  緑色蛍光タンパク質結合一本鎖人工抗体を用いた癌可視化システムの構築および臨床応用
  自 2018年, 至 2018年
• 基盤研究(B)
  免疫系ヒト化マウスを用いた癌免疫回避機構解明と次世代遺伝子ワクチンによる克服戦略
  自 2017年, 至 2017年
• 基盤研究(C)
  緑色蛍光タンパク質結合一本鎖人工抗体を用いた癌可視化システムの構築および臨床応用
  自 2017年, 至 2017年
• 基盤研究（B）
  免疫系ヒト化マウスを用いた癌免疫回避機構解明と次世代遺伝子ワクチンによる克服戦略
  自 2016年, 至 2016年
• 基盤研究(B)
  高機能型低分子二重特異性抗体への革新的がん特異的構造変換デザイン
  自 2015年, 至 2018年
• 挑戦的萌芽研究
  低分子二重特異性抗体の機能的な構造の解明に向けた既存抗ペプチド抗体の結晶化抗体化
  自 2015年, 至 2017年
• 基盤研究(B)
  高活性二重特異性抗体の創製に資する至適な抗原配置の先端的構造解析による描像
  自 2023年, 至 2023年
• 基盤研究(B)
  酵素・抗体・アプタマーの近接を利用した単一工程電気化学センサーの開発
  自 2023年, 至 2023年
• 基盤研究(B)
  クライオ電顕解析による分子配向の最適化に基づく多機能性プロドラッグ抗体の創製
  自 2023年, 至 2025年

論文

• タンパク質工学を駆使した多重特異性抗体の開発
  前島 敦, 浅野竜太郎
  生物工学会誌
  生物工学会
  2023年06月25日, （MISC）総説・解説（学術雑誌）, 共同, 101, 6, 281, 284
• Functional integration of protein A binding ability to antibody fragments for convenient and tag-free purification
  Kuwahara, Atsushi; Nazuka, Misae; Kuroki, Yuri; Ito, Kohei; Watanabe, Shunsuke; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  BIOENGINEERED
  TAYLOR & FRANCIS INC
  Although the development of small therapeutic antibodies is important, the affinity tags used for their purification often result in heterogeneous production and immunogenicity. In this study, we integrated Staphylococcus aureus protein A (SpA) binding ability into antibody fragments for convenient and tag-free purification. SpA affinity chromatography is used as a global standard purification method for conventional antibodies owing to its high binding affinity to the Fc region. SpA also has a binding affinity for some variable heavy domains (VH) classified in the VH3 subfamily. Through mutagenesis based on alignment and structural modeling results using the SpA-VH3 cocrystal structure, we integrated the SpA-binding ability into the anti-CD3 single-chain Fv. Furthermore, we applied this mutagenesis approach to more complicated small bispecific antibodies and successfully purified the antibodies using SpA affinity chromatography. The antibodies retained their biological function after purification. Integration of SpA-binding ability into conventional antibody fragments simplifies the purification and monitoring of the production processes and, thus, is an ideal strategy for accelerating the development of small therapeutic antibodies. Furthermore, because of its immunoactivity, the anti-CD3 variable region with SpA-binding ability is an effective building block for developing engineered cancer therapeutic antibodies without the Fc region.
  2023年12月31日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 14, 1, 2165-5979, DOI(公開)(r-map)
• Cancer therapeutic trispecific antibodies recruiting both T and natural killer cells to cancer cells
  Kimura, Kouki; Kuwahara, Atsushi; Suzuki, Saori; Nakanishi, Takeshi; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  ONCOLOGY REPORTS
  SPANDIDOS PUBL LTD
  T cells and natural killer (NK) cells are major effector cells recruited by cancer therapeutic bispecific antibodies; however, differences in the populations of these cells in individual tumors limit the general use of these antibodies. In the present study, trispecific antibodies were created, namely T cell and NK cell engagers (TaKEs), that recruit both T cells and NK cells. Notably, three Fc-fused TaKEs were designed, TaKE1-Fc, TaKE2-Fc and TaKE3-Fc, using variable fragments targeting the epidermal growth factor receptor on tumor cells, CD3 on T cells, and CD16 on NK cells. Among them, TaKE1-Fc was predicted to form a circular tetrabody-like configuration and exhibited the highest production and greatest cancer growth inhibitory effects. TaKE1 was prepared from TaKE1-Fc by digesting the Fc region for further functional evaluation. The resulting TaKE1 exhibited trispecificity via its ability to bind cancer cells, T cells and NK cells, as well as comparable or greater cancer growth inhibitory effects to those of two bispecific antibodies that recruit T cells and NK cells, respectively. A functional trispecific antibody with the potential to exert strong therapeutic effects independent of T cell and NK cell populations was developed.
  2023年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 50, 6, 1021-335X, DOI(公開)(r-map)
• Incorporation of a repeated polypeptide sequence in therapeutic antibodies as a universal masking procedure: A case study of T cell-engaging bispecific antibodies
  Maejima, Atsushi; Suzuki, Saori; Makabe, Koki; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  NEW BIOTECHNOLOGY
  ELSEVIER
  Prodrug design is a promising approach for reducing the off-target effects of therapeutic antibodies, particularly bispecific antibodies (bsAbs) that recruit T cells for activation; this design uses masking sequences that inhibit antibody binding until they reach the tumor microenvironment, where they are removed. In this study, we propose PAS, a polypeptide sequence composed of repeated Pro, Ala, and Ser residues, as a universal masking sequence. PAS has no specificity, but can inhibit antibody binding through steric hindrance caused by its large fluid dynamic radius and disordered structure; additionally, its length can be adjusted. We fused PAS to the Nterminus of an anti-CD3 single-chain variable fragment (scFv) and a bsAb, that targets both the epidermal growth factor receptor and CD3, via a recognition sequence cleaved by cancer-related proteases. PAS integration inhibited anti-CD3 scFv binding with higher efficacy than the epitope sequence, and the extent of inhibition was proportional to the length of the PAS sequence. For masked bsAbs, T cell-binding ability, cancer growth inhibition effects, and T cell activation effects were also reduced depending on the length of PAS and were fully restored upon removing PAS sequences using protease. The masking procedure using PAS was successfully applied to another scFv. The provision to adjust the masking effects of PAS by tuning its length, makes PAS fusion a valuable tool for the universal design of prodrug antibodies.
  2023年11月25日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 77, 1871-6784, DOI(公開)(r-map), 80, 89
• Construction of IgG-Fab² bispecific antibody via intein-mediated protein trans-splicing reaction
  Yamada, Risa; Nakahara, Ishin; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro; Nakanishi, Takeshi; Makabe, Koki
  SCIENTIFIC REPORTS
  NATURE PORTFOLIO
  A bispecific antibody (bsAb) is a class of engineered antibody molecules that simultaneously binds to two different antigens by having two kinds of antigen-binding domains. One of the major obstacles for the bsAb production is the incorrect chain-pairing problem, wherein each heavy and light chain should form pairings with the correct counterpart's chains, but the structural similarity of the incorrect partners also forms the incorrect pairings. This study aimed to demonstrate a bsAb construction method using intein-mediated protein trans-splicing to create IgG-Fab(2)-type bsAbs, which is a modified antibody with a structure in which two additional Fabs are linked to the N-terminus of the heavy chain of an IgG molecule. The chain-paring problem between a heavy chain and a light chain is circumvented by separate expression and purification of the IgG part and the Fab part. We found that the deletion of a possible glycosylation residue improved the reaction yield and side-reaction cleavage in the protein ligation step. The resulting bsAb, IgG-Fab(2) (Her2/CD3), demonstrated target binding activity and cytotoxicity mediated by activated T cells. These results indicate that the use of the protein ligation to produce the IgG-Fab(2) type bsAb will expand the bsAb production method.
  2023年09月25日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 13, 1, 2045-2322, DOI(公開)(r-map)
• Protein engineering of antibody fragments for pharmaceutical production
  Kuwahara, Atsushi; Ikebukuro, Kazunori; Asano, Ryutaro
  APPLIED PHYSICS REVIEWS
  AIP Publishing
  Antibody fragments without the Fc region are attracting attention in the pharmaceutical industry due to their high ability to penetrate solid tissues, cost-effective expression using microbial expression systems, and distinctive modes of action compared to those of full-size antibodies. Based on these characteristics, several antibody fragment agents have been approved. However, developing platform engineering methodologies to accelerate their development is important. In this review, we summarize and discuss protein engineering strategies for preparing therapeutic antibody fragments composed of antibody variable domains. Three (introduction of high-solubility tag systems, complementarity-determining region grafting, and domain arrangements) and two (introduction of purification tag systems and mutagenesis studies for protein L- or protein A-binding) protein engineering strategies have been reported for the cultivation and purification processes, respectively. Fusion tags might negatively impact molecular folding, function, immunogenicity, and final yield. If the production behavior of antibody fragments is not improved through complementarity-determining region grafting, domain arrangements, or human sequence-based mutagenesis, using additional fusion tag systems should be considered, with careful attention to the points described above. This summarized knowledge regarding protein engineering strategies for effectively producing antibody fragments will further accelerate therapeutic antibody fragment development.
  2023年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 10, 3, 1931-9401, DOI(公開)(r-map)
• Universal Design of Luciferase Fusion Proteins for Epigenetic Modifications Detection Based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer
  Miyata, Takamichi; Shimamura, Hazuki; Asano, Ryutaro; Yoshida, Wataru
  ANALYTICAL CHEMISTRY
  AMER CHEMICAL SOC
  Global hypomethylation and promoter hyper-methylation of tumor-suppressor genes are the hallmarks of cancer. We previously reported a global DNA methylation level sensing system based on dual-color bioluminescence resonance energy transfer (BRET) using methyl-CpG binding domain (MBD)-fused firefly luciferase (Fluc) and unmethyl-CpG binding domain (CXXC)-fused Oplophorus luciferase (Oluc). Moreover, BRET-based hydroxymethylation and hemi-methylation level sensing systems have been developed using hydroxymethyl-CpG and hemi-methyl-CpG binding domain-fused Fluc. These studies suggest that target epigenetic modifications can be simultaneously quantified using target-modification-binding protein-fused luci-ferases. In this study, we focused on the SnoopTag (SnT)/SnoopCatcher (SnC) protein ligation system to establish a universal design for fusion protein construction for any combination. SnT spontaneously forms an isopeptide bond with SnC; therefore, any kind of fusion protein would be constructed by the SnT/SnC system. To establish the proof of concept, MBD-SnT, CXXC-SnT, and SnC-Oluc were prepared and ligated MBD-SnT or CXXC-SnT to SnC-Oluc. The ligation products of MBD-SnT-SnC-Oluc and CXXC-SnT-SnC-Oluc showed luciferase activity and specific binding activity to methyl-CpG and unmethyl-CpG, respectively. The BRET signal using MBD-SnT-SnC-Oluc and CXXC-SnT-SnC-Oluc increased the amount of methyl-CpG and unmethyl-CpG in genomic DNA, respectively. There was a significant negative correlation between the BRET signals; therefore, the global DNA methylation level was quantified using the BRET signals (R2 = 0.99, and R.S.D. <3.5%). These results indicate that the SnT/SnC protein ligation system can be utilized to construct target modification-binding protein-fused luciferases in any combination that detects target modifications in genomic DNA based on BRET.
  2023年02月07日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 95, 7, 0003-2700, DOI(公開)(r-map), 3799, 3805
• Development of a Versatile Method to Construct Direct Electron Transfer-Type Enzyme Complexes Employing SpyCatcher/SpyTag System
  Yanase, Takumi; Okuda-Shimazaki, Junko; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji; Tsugawa, Wakako
  INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
  MDPI
  The electrochemical enzyme sensors based on direct electron transfer (DET)-type oxidoreductase-based enzymes are ideal for continuous and in vivo monitoring. However, the number and types of DET-type oxidoreductases are limited. The aim of this research is the development of a versatile method to create a DET-type oxidoreductase complex based on the SpyCatcher/SpyTag technique by preparing SpyCatcher-fused heme c and SpyTag-fused non-DET-type oxidoreductases, and by the in vitro formation of DET-type oxidoreductase complexes. A heme c containing an electron transfer protein derived from Rhizobium radiobacter (CYTc) was selected to prepare SpyCatcher-fused heme c. Three non-DET-type oxidoreductases were selected as candidates for the SpyTag-fused enzyme: fungi-derived flavin adenine dinucleotide (FAD)-dependent glucose dehydrogenase (GDH), an engineered FAD-dependent d-amino acid oxidase (DAAOx), and an engineered FMN-dependent l-lactate oxidase (LOx). CYTc-SpyCatcher (CYTc-SC) and SpyTag-Enzymes (ST-GDH, ST-DAAOx, ST-LOx) were prepared as soluble molecules while maintaining their redox properties and catalytic activities, respectively. CYTc-SC/ST-Enzyme complexes were formed by mixing CYTc-SpyCatcher and SpyTag-Enzymes, and the complexes retained their original enzymatic activity. Remarkably, the heme domain served as an electron acceptor from complexed enzymes by intramolecular electron transfer; consequently, all constructed CYTc-SC/ST-Enzyme complexes showed DET ability to the electrode, demonstrating the versatility of this method.
  2023年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 24, 3, DOI(公開)(r-map)
• Development of T cell-dependent bispecific antibody (TDB) against solid tumors
  Itsukaichi, Mikiko; Tsumura, Ryo; Asano, Ryutaro; Yasunaga, Masahiro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2023年02月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 114, 1347-9032, 2205, 2205
• Evaluation of drug delivery of therapeutic antibodies using a refractory tumor spheroid model
  Harada, Kensuke; Yasunaga, Masahiro; Tsumura, Ryo; Anzai, Takahiro; Asano, Ryutaro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2023年02月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 114, 1347-9032, 1925, 1925
• Novel approaches to immunoregulation utilizing next-generation therapeutic antibodies
  Yasunaga, Masahiro; Tsumura, Ryo; Itsukaichi, Mikiko; Yang, Shiqi; Anzai, Takahiro; Asano, Ryutaro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2023年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 114, 1347-9032, 1805, 1805
• Strategies to simplify operation procedures for applying labeled antibody-based immunosensors to point-of-care testing
  Kimura, Hayato; Asano, Ryutaro
  ANALYTICAL BIOCHEMISTRY
  ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE
  Point-of-care testing (POCT) is an ideal testing format for the rapid and on-site detection of analytes in patients, and facilitates disease diagnosis and monitoring. Molecular recognition elements are required for the specific detection of analytes, and biosensors that use antibodies as the molecular recognition elements are called immunosensors. Traditional immunosensors such as sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) require complicated procedures to form immunocomplexes consisting of detection antibodies, analytes, and capture antibodies. They also require long incubation times, washing procedures, and large and expensive specialized equipment that must be operated by laboratory technicians. Immunosensors for POCT should be systems that use relatively small pieces of equipment and do not require special training. In this review, to help in the construction of immunosensors for POCT, we have summarized the recently reported strategies for simpli-fying the operation, incubation, and washing procedures. We focused on the optical and electrochemical detection principles of immunosensors, compared the strategies for operation, sensitivity, and detection devices and discussed the ideal system. Combining detection devices that can be fabricated inexpensively and strategies that enable simplification of operation procedures and enhance sensitivities will contribute to the development of immunosensors for POCT.
  2022年10月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 654, 0003-2697, DOI(公開)(r-map)
• Structure of lactate oxidase from Enterococcus hirae revealed new aspects of active site loop function: Product-inhibition mechanism and oxygen gatekeeper
  Hiraka, Kentaro; Yoshida, Hiromi; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; La Belle, Jeffrey T.; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  PROTEIN SCIENCE
  WILEY
  l-Lactate oxidase (LOx) is a flavin mononucleotide (FMN)-dependent triose phosphate isomerase (TIM) barrel fold enzyme that catalyzes the oxidation of l-lactate using oxygen as a primary electron acceptor. Although reductive half-reaction mechanism of LOx has been studied by structure-based kinetic studies, oxidative half-reaction and substrate/product-inhibition mechanisms were yet to be elucidated. In this study, the structure and enzymatic properties of wild-type and mutant LOxs from Enterococcus hirae (EhLOx) were investigated. EhLOx structure showed the common TIM-barrel fold with flexible loop region. Noteworthy observations were that the EhLOx crystal structures prepared by co-crystallization with product, pyruvate, revealed the complex structures with d-lactate form ligand, which was covalently bonded with a Tyr211 side chain. This observation provided direct evidence to suggest the product-inhibition mode of EhLOx. Moreover, this structure also revealed a flip motion of Met207 side chain, which is located on the flexible loop region as well as Tyr211. Through a saturation mutagenesis study of Met207, one of the mutants Met207Leu showed the drastically decreased oxidase activity but maintained dye-mediated dehydrogenase activity. The structure analysis of EhLOx Met207Leu revealed the absence of flipping in the vicinity of FMN, unlike the wild-type Met207 side chain. Together with the simulation of the oxygen-accessible channel prediction, Met207 may play as an oxygen gatekeeper residue, which contributes oxygen uptake from external enzyme to FMN. Three clades of LOxs are proposed based on the difference of the Met207 position and they have different oxygen migration pathway from external enzyme to active center FMN.
  2022年10月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 31, 10, 0961-8368, DOI(公開)(r-map)
• Development of a DNA aptamer that binds to the complementarity-determining region of therapeutic monoclonal antibody and affinity improvement induced by pH-change for sensitive detection
  Saito, Taro; Shimizu, Yutaka; Tsukakoshi, Kaori; Abe, Koichi; Lee, Jinhee; Ueno, Kinuko; Asano, Ryutaro; Jones, Brian, V; Yamada, Tomohiro; Nakano, Tatsuki; Tong, Jiaxing; Hishiki, Asami; Hara, Kodai; Hashimoto, Hiroshi; Sode, Koji; Toyo'oka, Toshimasa; Todoroki, Kenichiro; Ikebukuro, Kazunori
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are successful biomedicines; however, evaluation of their pharmacokinetics and pharmacodynamics demands highly specific discrimination from human immunoglobulin G naturally present in the blood. Here, we developed a novel anti-idiotype aptamer (termed A14#1) with extraordinary specificity against the anti-vascular endothelial growth factor therapeutic mAb, bevacizumab. Structural analysis of the antibody-aptamer complex showed that several bases of A14#1 recognized only the complementarity determining region (CDR) of bevacizumab, thereby contributing to its extraordinary specificity. As the CDR of bevacizumab is predicted to be highly positively charged under mildly acidic conditions and that DNA is negatively charged, the affinity of A14#1 to bevacizumab markedly increased at pH 4.7 (K-D = 44 pM) than at pH 7.4 (K-D = 12 nM). A14#1-based electrochemical detection method capable of detecting 31 pM of bevacizumab at pH 4.7 was thus developed. A14#1 could be potentially useful for therapeutic drug measurement as a novel ligand of bevacizumab.
  2022年05月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 203, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Development of a POCT type insulin sensor employing anti-insulin single chain variable fragment based on faradaic electrochemical impedance spectroscopy under single frequency measurement
  Khanwalker, Mukund; Fujita, Rinko; Lee, Jinhee; Wilson, Ellie; Ito, Kohei; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; LaBelle, Jeffrey; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  To improve glycemic control managed through insulin administration, recent studies have focused on developing hand-held point-of-care testing (POCT) electrochemical biosensors for insulin measurement. Amongst them, anti insulin IgG-based sensors show promise in detecting insulin with high specificity and sensitivity. However, fabrication of electrochemical sensors with IgG antibodies can prove challenging because of their larger molecular size. To overcome these limitations, this study focuses on utilizing the anti-insulin single chain variable fragment (scFv) as a biosensing molecule with single-frequency faradaic electrochemical impedance spectroscopy (EIS). By comparing two different immobilization methods, covalent conjugation via succinimidyl ester and non-covalent poly-histidine chelation, we demonstrated effective modification of the electrode surface with anti insulin scFv, while retaining its specific recognition toward insulin. Sensor performance was confirmed via the concentration-dependent faradaic electrochemical impedance change using potassium ferricyanide as a redox probe. The optimal frequency for measurement was determined to be the peak slope of the calculated impedance correlation with respect to frequency. Based on the identified optimized frequency, we performed single frequency measurement of insulin within a concentration range of 10 pM-100 nM. This study can aid in developing a future point-of-care sensor which rapidly and sensitively measures insulin across a dynamic range of physiological concentrations, with label-free detection.
  2022年03月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 200, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Transient potentiometry based D-serine sensor using engineered D-amino acid oxidase showing quasi-direct electron transfer property
  Takamatsu, Shouhei; Lee, Inyoung; Lee, Jinhee; Asano, Ryutaro; Tsugawa, Wakako; Ikebukuro, Kazunori; Dick, Jeffrey E.; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  D-Serine biosensing has been extensively reported based on enzyme sensors using flavin adenine dinucleotide (FAD) -dependent n-amino acid oxidase (DAAOx), based on the monitoring of hydrogen peroxide generated by the enzymatic reaction, which is affected by dissolved oxygen concentration in the measurement environment in in vivo use. Here we report a novel sensing principle for o-serine, transient potentiometry based o-serine sensor using engineered DAAOx showing quasi-direct electron transfer (DET) property. DAAOx Gly52Val mutant, revealed to possess dye-mediated dehydmgenase activity using artificial synthetic electron acceptors, while its oxidase activity was negligible. The enzyme was immobilized on electrode and was modified with amine-reactive phenazine ethosulfate, resulted an enzyme electrode showing quasi-DET type response. Although OCP based monitoring took more than several minutes to obtain steady state OCP value, the time dependent OCP change monitoring, transient potentiometry, provided rapid and sensitive sensor signals. While dOCP/dt based monitoring was suitable for sensing with longer than 5 s time resolution with o-serine concentration range between 0.5 mM and 5 mM, dOCP/d root t based monitoring is suitable for o-serine monitoring with much shorter time resolution (less than 1 s) with high sensitivity with wider dynamic range (20 mu M-30 mM). The maximum dOCP/d root t was -39.2 +/- 2.0 mV/s(1/2), the K-m(app) was 1.9 mM, and the lower limit of detection was 20 mu M. In addition, D-serine monitoring was also possible in the artificial cerebrospinal fluid. The transient potentiometry based sensing reported in this study will be further utilized to realize miniaturized, continuous, real-time, in vivo sensor for o-serine monitoring.
  2022年03月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 200, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• 電気化学イムノセンサーを指向した人工抗体の開発
  浅野竜太郎
  電気化学
  公益社団法人電気化学会
  2022年03月05日, （MISC）総説・解説（学術雑誌）, 単独, 90, 1, 69, 69
• Development of T cell-dependent bispecific antibodies and an immunoregulation approach against refractory solid tumor
  Yasunaga, Masahiro; Tsumura, Ryo; Anzai, Takahiro; Asano, Ryutaro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2022年02月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 113, 1347-9032, DOI(公開)(r-map), 1265, 1265
• Fabrication of Fragment Antibody-Enzyme Complex as a Sensing Element for Immunosensing
  Oda, Miho; Asano, Ryutaro
  INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
  MDPI
  Antibody-enzyme complexes (AECs) are ideal molecular recognition elements for immunosensing applications. One molecule possesses both a binding ability to specific targets and catalytic activity to gain signals, particularly oxidoreductases, which can be integrated into rapid and sensitive electrochemical measurements. The development of AECs using fragment antibodies rather than intact antibodies, such as immunoglobulin G (IgG), has attracted attention for overcoming the ethical and cost issues associated with the production of intact antibodies. Conventionally, chemical conjugation has been used to fabricate AECs; however, controlling stoichiometric conjugation using this method is difficult. To prepare homogeneous AECs, methods based on direct fusion and enzymatic conjugation have been developed, and more convenient methods using Catcher/Tag systems as coupling modules have been reported. In this review, we summarize the methods for fabricating AECs using fragment antibodies developed for sensing applications and discuss the advantages and disadvantages of each method.
  2022年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 23, 3, DOI(公開)(r-map)
• 低分子型二重特異性抗体の高機能化戦略
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  バイオサイエンスとインダストリー
  バイオインダストリー協会
  2022年01月10日, （MISC）総説・解説（学術雑誌）, 共同, 80, 1, 40, 41
• Light-induced production of isobutanol and 3-methyl-1-butanol by metabolically engineered cyanobacteria
  Kobayashi, Shunichi; Atsumi, Shota; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji; Asano, Ryutaro
  MICROBIAL CELL FACTORIES
  BMC
  Background: Cyanobacteria are engineered via heterologous biosynthetic pathways to produce value-added chemicals via photosynthesis. Various chemicals have been successfully produced in engineered cyanobacteria. Chemical inducer-dependent promoters are used to induce the expression of target biosynthetic pathway genes. A chemical inducer is not ideal for large-scale reactions owing to its high cost; therefore, it is important to develop scaling-up methods to avoid their use. In this study, we designed a green light-inducible alcohol production system using the CcaS/CcaR green light gene expression system in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (PCC 6803). Results: To establish the green light-inducible production of isobutanol and 3-methyl-1-butanol (3MB) in PCC 6803, keto-acid decarboxylase (kdc) and alcohol dehydrogenase (adh) were expressed under the control of the CcaS/CcaR system. Increases in the transcription level were induced by irradiation with red and green light without severe effects on host cell growth. We found that the production of isobutanol and 3MB from carbon dioxide (CO2) was induced under red and green light illumination and was substantially repressed under red light illumination alone. Finally, production titers of isobutanol and 3MB reached 238 mg L-1 and 75 mg L-1, respectively, in 5 days under red and green light illumination, and these values are comparable to those reported in previous studies using chemical inducers. Conclusion: A green light-induced alcohol production system was successfully integrated into cyanobacteria to produce value-added chemicals without using expensive chemical inducers.The green light-regulated production of isobutanol and 3MB from CO2 is eco-friendly and cost-effective. This study demonstrates that light regulation is a potential tool for producing chemicals and increases the feasibility of cyanobacterial bioprocesses.
  2022年01月06日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 21, 1, DOI(公開)(r-map)
• Continuous electrochemical monitoring of L-glutamine using redox-probe-modified L-glutamine-binding protein based on intermittent pulse amperometry
  Takamatsu, Shouhei; Lee, Jinhee; Asano, Ryutaro; Tsugawa, Wakako; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  SENSORS AND ACTUATORS B-CHEMICAL
  ELSEVIER SCIENCE SA
  The development of a continuous electrochemical monitoring system using a periplasmic binding protein (PBP), which changes its conformational dynamics upon ligand binding, is promising for in situ, real-time, continuous measurement technologies for use in effective biological production processes. This study focuses on a continuous L-glutamine biosensor based on Escherichia coli-derived L-glutamine-binding protein (QBP), a PBP that can speficically bind to L-glutamine. In this sensor, QBP was modified with a redox probe, amine-reactive phenazine ethosulfate (PES), and the conformational change in QBP through the recognition of L-glutamine was monitored electrochemically by intermittent pulse amperometry (IPA) based on the change in the access of QBP-modified PES to the electrode. This sensor exhibited a change in the current against logarithmic L-glutamine concentrations between 0.2-50 mu M. Continuous monitoring of L-glutamine, based on IPA measurements, revealed that continuous changes in L-glutamine concentration were observed for both increasing and decreasing concentrations. During continuous monitoring, L-glutamine concentration was monitored between 50 and 500 mu M, with a limit of detection of 50 mu M. This result is expected to address the future development of an electrochemical biosensor for in situ, real-time, continuous monitoring of various metabolites based on PBPs.
  2021年11月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 346, DOI(公開)(r-map)
• Rapid, convenient, and highly sensitive detection of human hemoglobin in serum using a high-affinity bivalent antibody-enzyme complex
  Miura, Daimei; Kimura, Hayato; Tsugawa, Wakako; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji; Asano, Ryutaro
  TALANTA
  ELSEVIER
  Human hemoglobin (Hb) is a biomarker of several diseases, and monitoring of Hb levels is required during emergent surgery. However, rapid and sensitive Hb detection methods are yet to be developed. The present study established a rapid, convenient, and highly sensitive detection method for Hb in human serum using a bivalent antibody-enzyme complex (AEC). AECs are promising sensing elements because of their ability to bind specific targets and their catalytic activity that produce signals. We recently reported a convenient and universal method to fabricate bivalent AECs with two antibody fragments, using the SpyCatcher/SpyTag system. The present study applied a bivalent AEC for highly sensitive and quantitative detection of human Hb. The bivalent anti-Hb AEC was successfully prepared by incubating both N- and C-terminus SpyCatcher-fused glucose dehydrogenase and SpyTag-fused anti-Hb single-chain variable fragments at 4 degrees C. As expected, the bivalent AEC for Hb with a multimeric structure showed higher affinity than the monovalent AEC, by means of avidity effects, unlike that for soluble epidermal growth factor receptor with a monomeric structure; this contributed to a great improvement in sensitivity. Finally, we established a rapid and wash-free homogeneous electrochemical detection system for Hb by integrating magnetic beads. The linear range of the system completely covered the clinically required Hb levels, even in human serum. This technology provides an ideal point-of-care test for Hb and other multimeric biomarkers.
  2021年11月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 234, 0039-9140, DOI(公開)(r-map)
• T Cell Bispecific Antibodies: An Antibody-Based Delivery System for Inducing Antitumor Immunity
  Kamakura, Daisuke; Asano, Ryutaro; Yasunaga, Masahiro
  PHARMACEUTICALS
  MDPI
  As a breakthrough immunotherapy, T cell bispecific antibodies (T-BsAbs) are a promising antibody therapy for various kinds of cancer. In general, T-BsAbs have dual-binding specificity to a tumor-associated antigen and a CD3 subunit forming a complex with the TCR. This enables T-BsAbs to crosslink tumor cells and T cells, inducing T cell activation and subsequent tumor cell death. Unlike immune checkpoint inhibitors, which release the brake of the immune system, T-BsAbs serve as an accelerator of T cells by stimulating their immune response via CD3 engagement. Therefore, they can actively redirect host immunity toward tumors, including T cell recruitment from the periphery to the tumor site and immunological synapse formation between tumor cells and T cells. Although the low immunogenicity of solid tumors increases the challenge of cancer immunotherapy, T-BsAbs capable of immune redirection can greatly benefit patients with such tumors. To investigate the detailed relationship between T-BsAbs delivery and their T cell redirection activity, it is necessary to determine how T-BsAbs deliver antitumor immunity to the tumor site and bring about tumor cell death. This review article discusses T-BsAb properties, specifically their pharmacokinetics, redirection of anticancer immunity, and local mechanism of action within tumor tissues, and discuss further challenges to expediting T-BsAb development.
  2021年11月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 14, 11, DOI(公開)(r-map)
• 二重特異性がん治療抗体の機能的な構造の理解に向けたあゆみ
  浅野竜太郎, 真壁幸樹, 田中良和, 熊谷 泉
  医学のあゆみ
  2021年08月07日, （MISC）総説・解説（商業誌）, 共同, 278, 6, 617, 622
• Evaluation of intercellular cross-linking abilities correlated with cytotoxicities of bispecific antibodies with domain rearrangements using AFM force-sensing
  Maejima, Atsushi; Ishibashi, Kenta; Kim, Hyonchol; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  Bispecific antibodies (bsAbs) are a promising engineered antibody format; thus, technologies for the fabrication and evaluation of functional bsAbs are attracting increasing attention. Here, based on atomic force microscopy (AFM) force-sensing integrated with a metal cup-attached AFM chip (cup-chip) to ensure efficient capture of a target cell on a cantilever, we established a novel method for measuring cross-linking ability that is correlated with the cytotoxicities of bsAbs targeting two cells. We previously reported that domain rearrangements of bsAbs affected their cytotoxicities; however, no differences in cross-linking ability for soluble antigens were observed by surface plasmon resonance. We predicted that there would be differences in molecular configurations to avoid steric hindrance in the cross-linking of the two whole target cells. A picked-up T cell lymphoma cell on the cantilever using a cup-chip was moved to approach a cancer cell adhered to a dish, and force-curve measurements were performed. The resulting forces mediated by the cross-linking of bsAbs with different domain orders were well-correlated with their cytotoxicities. The AFM force-sensing method established herein may reflect steric hindrance of intercellular cross-linking, and thus has the potential to evaluate the net function of bsAbs and contribute to the generation of functional bsAbs.
  2021年04月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 178, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Development of glycated peptide enzyme sensor based flow injection analysis system for haemoglobin A1c monitoring using quasi-direct electron transfer type engineered fructosyl peptide oxidase
  Hatada, Mika; Saito, Satomi; Yonehara, Satoshi; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  Haemoglobin A1e (hemoglobin A1e, HbA1c) is an important long-term glycemic control marker for diabetes. The aim of this study was to develop an enzyme flow injection analysis (FIA) system using engineered fructosyl peptide oxidase (FPOx) based on 2.5th generation principle for an HbA1c automated analytical system. FPOx from Phaeosphaeria nodorum (PnFPOx) was engineered by introducing a Lys residue at the R414 position, to be modified with amine reactive phenazine ethosulfate (arPES) in proximity of FAD. The engineered PnFPOx mutant with minimized oxidase activity, N56A/R414K, showed quasi-direct electron transfer (quasi-DET) ability after PES-modification. The FIA system was constructed by employing a PES-modified PnFPOx N56A/R414K and operated at 0 V against Ag/AgCl. The system showed reproducible responses with a linear range of 20-500 mu M for both fructosyl valine (FV) and fructosyl valylhistidine (FVH), with sensitivities of 0.49 nA mu AO and 0.13 nA mu M-1, and the detection limits of 1.3 mu M and 2.0 mu M for FV and FVH, respectively. These results indicate that the enzyme electrochemical FIA system covers the clinical range of HbA1c detection for more 200 consecutive measurements. Protease digested three different levels of HbA1c samples including healthy and diabetic range subjects were also measured with the FIA system. Thus, it will be possible to develop an integrated system consisting of sample pretreatment and sample electrochemical measurement based on an FIA system possessing quasi-DET type PnFPOx.
  2021年04月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 177, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Strategic design and improvement of the internal electron transfer of heme b domain-fused glucose dehydrogenase for use in direct electron transfer-type glucose sensors
  Ito, Kohei; Okuda-Shimazaki, Junko; Kojima, Katsuhiro; Mori, Kazushige; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  A fusion enzyme composed of an Aspergillus flavus-derived flavin adenine dinucleotide glucose dehydrogenase (AfGDH) and an electron transfer domain of Phanerochaete chrysosporium-derived cellobiose dehydrogenase (Pcyb) was previously reported to show the direct electron transfer (DET) ability to an electrode. However, its slow intramolecular electron transfer (IET) rate from the FAD to the heme, limited the sensor signals. In this study, fusion FADGDH (Pcyb-AfGDH) enzymes were strategically redesigned by performing docking simulation, following surface-electrostatic potential estimation in the predicted area. Based on these predictions, we selected the amino acid substitution on Glu324, or on Asn408 to Lys to increase the positive charge at the rim of the interdomain region. Pcyb-AfGDH mutants were recombinantly produced using Pichia pastoris as the host microorganism, and their IET was evaluated. Spectroscopic observations showed that the Glu324Lys (E324K) and Asn408Lys (N408K) Pcyb-AfGDH mutants showed approximately 1.70and 9.0-fold faster IET than that of wildtype Pcyb-AfGDH, respectively. Electrochemical evaluation revealed that the mutant Pcyb-AfGDHimmobilized electrodes showed higher DET current values than that of the wildtype Pcyb-AfGDH-immobilized electrodes at pH 6.5, which was approximately 9-fold higher in the E324K mutant and 15-fold higher in the N408K mutant, than in the wildtype. Glucose enzyme sensors employing N408K mutant was able to measure glucose concentration under physiological condition using artificial interstitial fluid at pH 7.4, whereas the one with wildtype Pcyb-AfGDH was not. These results indicated that the sensor employed the redesigned mutant Pcyb-AfGDH can be used for future continuous glucose monitoring system based on direct electron transfer principle. (247 words).
  2021年03月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 176, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Rational design of direct electron transfer type L-lactate dehydrogenase for the development of multiplexed biosensor
  Hiraka, Kentaro; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; Yokus, Murat A.; Ikebukuro, Kazunori; Daniele, Michael A.; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  The development of wearable multiplexed biosensors has been focused on systems to measure sweat L-lactate and other metabolites, where the employment of the direct electron transfer (DET) principle is expected. In this paper, a fusion enzyme between an engineered L-lactate oxidase derived from Aerococcus viridans, AvLOx A96L/N212K mutant, which is minimized its oxidase activity and b-type cytochrome protein was constructed to realize multiplexed DET-type lactate and glucose sensors. The sensor with a fusion enzyme showed DET to a gold electrode, with a limited operational range less than 0.5 mM. A mutation was introduced into the fusion enzyme to increase K-m value and eliminate its substrate inhibition to construct b2LOxS. Together with the employment of an outer membrane, the detection range of the sensor with b2LOxS was expanded up to 10 mM. A simultaneous lactate and glucose monitoring system was constructed using a flexible thin-film multiplexed electrodes with b2LOxS and a DET-type glucose dehydrogenase, and evaluated their performance in the artificial sweat. The sensors achieved simultaneous detection of lactate and glucose without cross-talking error, with the detected linear ranges of 0.5-20 mM for lactate and 0.1-5 mM for glucose, sensitivities of 4.1 nA/mM.mm(2) for lactate and 56 nA/mM.mm(2) for glucose, and limit of detections of 0.41 mM for lactate and 0.057 mM for glucose. The impact of the presence of electrochemical interferants (ascorbic acid, acetaminophen and uric acid), was revealed to be negligible. This is the first report of the DET-type enzyme based lactate and glucose dual sensing systems.
  2021年03月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 176, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Anti-EGFR antibody 528 binds to domain III of EGFR at a site shifted from the cetuximab epitope
  Makabe, Koki; Yokoyama, Takeshi; Uehara, Shiro; Uchikubo-Kamo, Tomomi; Shirouzu, Mikako; Kimura, Kouki; Tsumoto, Kouhei; Asano, Ryutaro; Tanaka, Yoshikazu; Kumagai, Izumi
  SCIENTIFIC REPORTS
  NATURE RESEARCH
  Antibodies have been widely used for cancer therapy owing to their ability to distinguish cancer cells by recognizing cancer-specific antigens. Epidermal growth factor receptor (EGFR) is a promising target for the cancer therapeutics, against which several antibody clones have been developed and brought into therapeutic use. Another antibody clone, 528, is an antagonistic anti-EGFR antibody, which has been the focus of our antibody engineering studies to develop cancer drugs. In this study, we explored the interaction of 528 with the extracellular region of EGFR (sEGFR) via binding analyses and structural studies. Dot blotting experiments with heat treated sEGFR and surface plasmon resonance binding experiments revealed that 528 recognizes the tertiary structure of sEGFR and exhibits competitive binding to sEGFR with EGF and cetuximab. Single particle analysis of the sEGFR-528 Fab complex via electron microscopy clearly showed the binding of 528 to domain III of sEGFR, the domain to which EGF and cetuximab bind, explaining its antagonistic activity. Comparison between the two-dimensional class average and the cetuximab/sEGFR crystal structure revealed that 528 binds to a site that is shifted from, rather than identical to, the cetuximab epitope, and may exclude known drugresistant EGFR mutations.
  2021年03月11日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 11, 1, 2045-2322, DOI(公開)(r-map)
• POCTを志向した均一かつ汎用的な抗体酵素複合体の調製法の開発と電気化学イムノセンサへの展開
  日本応用酵素協会誌
  公益財団法人日本応用酵素協会
  2021年03月01日, （MISC）総説・解説（その他）, 共同, 56, 1, 9
• Rapid and homogeneous electrochemical detection by fabricating a high affinity bispecific antibody-enzyme complex using two Catcher/Tag systems
  Kimura, Hayato; Miura, Daimei; Tsugawa, Wakako; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji; Asano, Ryutaro
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  Antibody-enzyme complexes (AECs) with binding ability to specific targets and catalytic activities to gain signals are known to be ideal sensing elements; however, AEC-based universal sensors applicable to point-of-care testing (POCT) have not yet been developed. Here, we achieved rapid and homogeneous electrochemical detection by fabricating a high-affinity bispecific AEC (bsAEC) using two Catcher/Tag systems. Recently, we reported a convenient and universal method to fabricate AECs using the SpyCatcher/SpyTag system. The resultant anti-epidermal growth factor receptor (anti-EGFR) AEC worked efficiently as a sensing element; however, the sensitivities did not meet the clinically required detection range of the soluble ectodomain of EGFR (sEGFR). To induce high affinity even to monomeric targets like sEGFR, we designed a convenient fabrication method for bsAEC using two Catcher/Tag systems, which did not express cross-reactivity. The anti-EGFR bsAEC was successfully prepared by constructing glucose dehydrogenase with two different catcher domains at the N- and C-terminus and by combining two corresponding Tag-fused anti-EGFR single-chain Fvs (scFvs), which recognize different epitopes on sEGFR. As expected, bsAEC showed a higher affinity than that of bivalent AEC with two identical anti-EGFR scFvs at low concentrations of sEGFR, and met the clinically required detection range of sEGFR. Further, by combining magnet beads, we established a rapid and wash-free homogeneous electrochemical detection method. This study offers new insights into the fabrication of universal POCT devices.
  2021年03月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 175, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Development of next generation antibody therapeutics utilizing DDS and molecular imaging
  Yasunaga, Masahiro; Manabe, Shino; Kamakura, Daisuke; Tsumura, Ryo; Fuchigami, Hirobumi; Asano, Ryutaro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2021年02月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 112, 1347-9032, 553, 553
• T cell-dependent bispecific antibody-induced two distinct mechanism of actions against solid tumor
  Kamakura, Daisuke; Asano, Ryutaro; Yasunaga, Masahiro
  CANCER SCIENCE
  WILEY
  2021年02月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 112, 1347-9032, 744, 744
• Mechanism of action of a T cell-dependent bispecific antibody as a breakthrough immunotherapy against refractory colorectal cancer with an oncogenic mutation
  Kamakura, Daisuke; Asano, Ryutaro; Kawai, Hiroki; Yasunaga, Masahiro
  CANCER IMMUNOLOGY IMMUNOTHERAPY
  SPRINGER
  T cell-dependent bispecific antibody (TDB)-induced T cell activation, which can eliminate tumor cells independent of MHC engagement, is expected to be a novel breakthrough immunotherapy against refractory cancer. However, the mechanism of action of TDBs has not been fully elucidated thus far. We focused on TDB-induced T cell-tumor cell contact as an important initial step in direct T cell-mediated tumor cell killing via transport of cytotoxic cell proteases (e.g., granzymes) with or without immunological synapse formation. Using an anti-EGFR/CD3 TDB, hEx3, we visualized and quantified T cell-tumor cell contact and demonstrated a correlation between the degree of cell contact and TDB efficacy. We also found that cytokines, including interferon-gamma (IFN gamma) and tumor necrosis factor-alpha (TNF alpha) secreted by activated T cells, damaged tumor cells in a cell contact-independent manner. Moreover, therapeutic experiences clearly indicated that hEx3, unlike conventional anti-EGFR antibodies, was effective against colorectal cancer (CRC) cells with mutant KRAS, BRAF, or PIK3CA. In a pharmacokinetic analysis, T cells spread gradually in accordance with the hEx3 distribution within tumor tissue. Accordingly, we propose that TDBs should have four action steps: 1st, passive targeting via size-dependent tumor accumulation; 2nd, active targeting via specific binding to tumor cells; 3rd, T cell redirection toward tumor cells; and 4th, TDB-induced cell contact-dependent (direct) or -independent (indirect) tumor cell killing. Finally, our TDB hEx3 may be a promising reagent against refractory CRC with an oncogenic mutation associated with a poor prognosis.
  2021年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 70, 1, 0340-7004, DOI(公開)(r-map), 177, 188
• Functional Domain Order of an Anti-EGFR x Anti-CD16 Bispecific Diabody Involving NK Cell Activation
  Kuwahara, Atsushi; Nagai, Keisuke; Nakanishi, Takeshi; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
  MDPI
  Bispecific antibodies (bsAbs) have emerged as promising therapeutics. A bispecific diabody (bsDb) is a small bsAb consisting of two distinct chimeric single-chain components, with two possible arrangements of the domains. We previously reported the effect of domain order on the function of a humanized bsDb targeting the epidermal growth factor receptor (EGFR) on cancer cells, and CD3 on T cells. Notably, the co-localization of a T-cell receptor (TCR) with CD3 is bulky, potentially affecting the cross-linking ability of bsDbs, due to steric hindrance. Here, we constructed and evaluated humanized bsDbs, with different domain orders, targeting EGFR and CD16 on natural killer (NK) cells (hEx16-Dbs). We predicted minimal effects due to steric hindrance, as CD16 lacks accessory molecules. Interestingly, one domain arrangement displayed superior cytotoxicity in growth inhibition assays, despite similar cross-linking abilities for both domain orders tested. In hEx16-Dbs specifically, domain order might affect the agonistic activity of the anti-CD16 portion, which was supported by a cytokine production test, and likely contributed to the superiority of one of the hEx16-Dbs. Our results indicate that both the target antigen and mode of action of an antibody must be considered in the construction of highly functional bsAbs.
  2020年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 21, 23, DOI(公開)(r-map)
• Association behavior and control of the quality of cancer therapeutic bispecific diabodies expressed in Escherichia coli
  Nakazawa, Hikaru; Onodera-Sugano, Tomoko; Sugiyama, Aruto; Tanaka, Yoshikazu; Hattori, Takamitsu; Niide, Teppei; Ogata, Hiromi; Asano, Ryutaro; Kumagai, Izumi; Umetsu, Mitsuo
  BIOCHEMICAL ENGINEERING JOURNAL
  ELSEVIER
  Diabody 31, a bispecific therapeutic antibody, is a heterodimer comprised of two types of chimeric single-chain variable fragments (scFv), that has been identified as a clone with high cytotoxicity against cancer cells. Diabody 31 is inactive as a homodimer and monomer, yet active as a heterodimer in solution. Herein, we examined the association between two kinds of diabodies, LH- and HL type, based on the behavior of four kinds of their constituent chimera scFvs, by size analysis. More than half of the LH diabody fraction, including two types of chimeric scFV that were equally expressed, and nearly all HL diabody fraction components, including one chimeric HL-L scFv, were in inactive form and changed components dynamically as time passed. The association of these diabodies corresponded to that of the scFv chimera, indicating that analysis of these chimeras could predict diabody quality. Furthermore, addition of the deficient HL-R chimera scFv, comprised of an unbalanced chimeric scFv ratio, to the HL diabody fraction increased cancer cell cytotoxicity, with maximal effects obtained upon repeating the process five times. These findings provide insights into the efficient construction of a functional diabody by noting the characteristics of associated diabodies and the molar ratio of expressed chimera scFvs.
  2020年08月15日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 160, 1369-703X, DOI(公開)(r-map)
• Development of bispecific antibodies using molecular imaging
  Kamakura, Daisuke; Yasunaga, Masahiro; Asano, Ryutaro; Matsumura, Yasuhiro
  CANCER RESEARCH
  AMER ASSOC CANCER RESEARCH
  2020年08月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 80, 16, 0008-5472, DOI(公開)(r-map)
• Build-up functionalization of anti-EGFR x anti-CD3 bispecific diabodies by integrating high-affinity mutants and functional molecular formats
  Asano, Ryutaro; Hosokawa, Katsuhiro; Taki, Shintaro; Konno, Shota; Shimomura, Ippei; Ogata, Hiromi; Okada, Mai; Arai, Kyoko; Onitsuka, Masayoshi; Omasa, Takeshi; Nakanishi, Takeshi; Umetsu, Mitsuo; Kumagai, Izumi
  SCIENTIFIC REPORTS
  NATURE PUBLISHING GROUP
  Designing non-natural antibody formats is a practical method for developing highly functional next-generation antibody drugs, particularly for improving the therapeutic efficacy of cancer treatments. One approach is constructing bispecific antibodies (bsAbs). We previously reported a functional humanized bispecific diabody (bsDb) that targeted epidermal growth factor receptor and CD3 (hEx3-Db). We enhanced its cytotoxicity by constructing an Fc fusion protein and rearranging order of the V domain. In this study, we created an additional functional bsAb, by integrating the molecular formats of bsAb and high-affinity mutants previously isolated by phage display in the form of Fv. Introducing the high-affinity mutations into bsDbs successfully increased their affinities and enhanced their cytotoxicity in vitro and in vivo. However, there were some limitations to affinity maturation of bsDb by integrating high-affinity Fv mutants, particularly in Fc-fused bsDb with intrinsic high affinity, because of their bivalency. The tetramers fractionated from the bsDb mutant exhibited the highest in vitro growth inhibition among the small bsAbs and was comparable to the in vivo anti-tumor effects of Fc-fused bsDbs. This molecule shows cost-efficient bacterial production and high therapeutic potential.
  2020年03月18日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 10, 1, 2045-2322, DOI(公開)(r-map)
• Rational engineering of Aerococcus viridans L-lactate oxidase for the mediator modification to achieve quasi-direct electron transfer type lactate sensor
  Hiraka, Kentaro; Kojima, Katsuhiro; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  The L-lactate oxidase (LOx) based lactate sensors are widely used for clinical diagnostics, sports medicine, and food quality control. However, dissolved oxygen interference and electroactive interferent effects are inherent issues of current lactate sensors. In this paper, a quasi-direct electron transfer (quasi-DET) type lactate sensor was developed using rationally engineered Aerococcus viridans LOx (AvLOx) modified with amine-reactive phenazine ethosulfate (PES). Since the modification of wild type AvLOx by PES did not result quasi-DET, engineered AvLOx with additional Lys residue was designed. The additional Lys residue was introduced by substituting residue locating on the surface of AvLOx, and within 20 angstrom of the isoalloxazine ring of FMN. Among several constructed mutants, Ala96Leu/Asn212Lys double mutant showed the highest dye-mediated dehydrogenase activity with negligible oxidase activity, showing quasi-DET properties after PES modification, when the enzyme was immobilized on screen printed carbon electrode. The constructed electrode did not show oxygen interference in cyclic voltammetric analysis and distinct catalytic current with 20 mM L-lactate. The sensor performance of a chronoamperometric L-lactate sensor employing PES modified Ala96Leu/Asn212Lys AvLOx, marked with linear range between 0 and 1 mM, with sensitivity of 13 mu A/mM.cm(2), and a limit of detection of 25 mu M for L-lactate. By applying -200 mV vs. Ag/AgCl, L-lactate could be monitored with negligible interference from 170 mu M ascorbic acid, 1.3 mM acetaminophen, 1.4 mM uric acid or 20 mM glucose. These results indicated that a quasi-DET type lactate sensor was developed that did not suffer from the interference of oxygen and representative electroactive ingredient compounds.
  2020年03月01日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 151, 0956-5663, DOI(公開)(r-map)
• Construction of a circularly connected VHH bispecific antibody (cyclobody) for the desirable positioning of antigen-binding sites
  Hemmi, Saki; Asano, Ryutaro; Kimura, Kouki; Umetsu, Mitsuo; Nakanishi, Takeshi; Kumagai, Izumi; Makabe, Koki
  BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
  ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE
  A bispecific antibody (bsAb) is an emerging class of next-generation biological therapeutics. BsAbs are engineered antibodies possessing dual antigen-binding paratopes in one molecule. The circular backbone topology has never been demonstrated, although an enormous number of bispecific constructs have been proposed. The circular topology is potentially beneficial for fixing the orientation of two paratopes and protection from exopeptidase digestion. We construct herein a circularly connected bispecific VHH, termed cyclobody, using the split-intein circular ligation of peptides and proteins. The constructed cyclobodies are protected from proteolysis with a retained bispecificity. The anti-EGFR x anti-GFP cyclobody can specifically stain EGFR-positive cells with GFP. The anti-EGFR x anti-CD16 cyclobody shows cytotoxic activity against EGFR-positive cancer cells with comparative activity of a tandem VHH construct. Successful demonstration of a new topology for the bispecific antibody will expand the construction strategy for developing antibody-based drugs and reagents. (C) 2019 Elsevier Inc. All rights reserved.
  2020年02月26日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 523, 1, 0006-291X, DOI(公開)(r-map), 72, 77
• Chemically Crosslinked Bispecific Antibodies for Cancer Therapy: Breaking from the Structural Restrictions of the Genetic Fusion Approach
  Ueda, Asami; Umetsu, Mitsuo; Nakanishi, Takeshi; Hashikami, Kentaro; Nakazawa, Hikaru; Hattori, Shuhei; Asano, Ryutaro; Kumagai, Izumi
  INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
  MDPI
  Antibodies are composed of structurally and functionally independent domains that can be used as building blocks to construct different types of chimeric protein-format molecules. However, the generally used genetic fusion and chemical approaches restrict the types of structures that can be formed and do not give an ideal degree of homogeneity. In this study, we combined mutation techniques with chemical conjugation to construct a variety of homogeneous bivalent and bispecific antibodies. First, building modules without lysine residues-which can be chemical conjugation sites-were generated by means of genetic mutation. Specific mutated residues in the lysine-free modules were then re-mutated to lysine residues. Chemical conjugation at the recovered lysine sites enabled the construction of homogeneous bivalent and bispecific antibodies from block modules that could not have been so arranged by genetic fusion approaches. Molecular evolution and bioinformatics techniques assisted in finding viable alternatives to the lysine residues that did not deactivate the block modules. Multiple candidates for re-mutation positions offer a wide variety of possible steric arrangements of block modules, and appropriate linkages between block modules can generate highly bioactive bispecific antibodies. Here, we propose the effectiveness of the lysine-free block module design for site-specific chemical conjugation to form a variety of types of homogeneous chimeric protein-format molecule with a finely tuned structure and function.
  2020年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 21, 3, DOI(公開)(r-map)
• Application of an engineered chromatic acclimation sensor for red-light-regulated gene expression in cyanobacteria
  Kobayashi, Shunichi; Nakajima, Mitsuharu; Asano, Ryutaro; Ferreira, Eunice A.; Abe, Koichi; Tamagnini, Paula; Atsumi, Shota; Sode, Koji
  ALGAL RESEARCH-BIOMASS BIOFUELS AND BIOPRODUCTS
  ELSEVIER
  The development of a versatile tool for the gene regulation in cyanobacteria is critical for the future realization of cyanobacterial bioprocessing. The use of chemical inducers to regulate gene expression are not practical considering their cost and technical difficulty in removing them from culture. Therefore, we have focused on a cyanobacteria-derived chromatic acclimation sensor, the green-light sensing system, CcaS/CcaR two-component system, derived from Synechocystis sp. PCC6803 (PCC6803) as a toll for genetic regulation. However, the regulation of gene expression levels by CcaS is not strict. We have previously developed a miniaturized CcaS, CcaS#11, which is a truncated CcaS showing gene induction under red-light illumination and strict repression under green-light illumination in Escherichia coll. In this study, CcaS#11 was transformed in cyanobacteria to achieve red-light-regulated gene expression in cyanobacteria. The application was first attempted in PCC6803 after knocking out genomic CcaS/CcaR system to exclude interference. The results revealed gene expression was only induced under red-light illumination and strictly repressed under green-light illumination. The red-lightregulated gene expression was also applied for a marine cyanobacteria, Synechococcus sp. NKBG15041c (NKBG15041c). In NKBG15041c, gene expression was induced under red-light illumination and strictly repressed under green-light illumination with a 2-fold higher ON/OFF ratio compared with the original CcaS/CcaR two-component system. Therefore, the constructed red-light-regulated gene expression system using CcaS#11 has a great potential as a platform technology for the further development of light-regulated bioprocesses with strict control in cyanobacteria.
  2019年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 44, 2211-9264, DOI(公開)(r-map)
• Convenient and Universal Fabrication Method for Antibody-Enzyme Complexes as Sensing Elements Using the SpyCatcher/SpyTag System
  Kimura, Hayato; Asano, Ryutaro; Tsukamoto, Natsumi; Tsugawa, Wakako; Sode, Koji
  ANALYTICAL CHEMISTRY
  AMER CHEMICAL SOC
  Antibody enzyme complexes (AECs) are ideal sensing elements, especially when oxidoreductases are used as the enzymes in the complex, with the potential to carry out rapid electrochemical measurements. However, conventional methods for the fabrication of AECs, including direct fusion and chemical conjugation, are associated with issues regarding the generation of insoluble aggregates and production of homogeneous AECs. Here, we developed a convenient and universal method for the fabrication of homogeneous AECs using the SpyCatcher/SpyTag system. We used an anti-epidermal growth factor receptor (EGFR) variable domain of a heavy chain antibody (VHH) and a glucose dehydrogenase (GDH) derived from Aspergillus flavus (AfGDH) as the model antibody and enzyme, respectively. Both SpyTag-fused VHH and SpyCatcher-fused AfGDH were successfully prepared using an Escherichia coli expression system, whereas anti-EGFR AECs were produced by simply mixing the two fusion proteins. A bivalent AEC, Af GDH with two VHH at both terminals, was also prepared and exhibited an increased affinity. A soluble EGFR was successfully detected in a dose-dependent manner using immobilized anti-EGFR immunoglobulin G (IgG) and bivalent AEC. We also confirmed the universality of this AEC fabricating method by applying it to another VHH. This method results in the convenient and universal preparation of sensing elements with the potential for electrochemical measurement.
  2018年12月18日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 90, 24, 0003-2700, DOI(公開)(r-map), 14500, 14506
• Esterification of PQQ Enhances Blood-Brain Barrier Permeability and Inhibitory Activity against Amyloidogenic Protein Fibril Formation
  Tsukakoshi, Kaori; Yoshida, Wataru; Kobayashi, Masaki; Kobayashi, Natsuki; Kim, Jihoon; Kaku, Toshisuke; Iguchi, Toshitsugu; Nagasawa, Kazuo; Asano, Ryutaro; Ikebukuro, Kazunori; Sode, Koji
  ACS CHEMICAL NEUROSCIENCE
  AMER CHEMICAL SOC
  Several neurodegenerative diseases have a common pathophysiology where selective damage to neurons results from the accumulation of amyloid oligomer proteins formed via fibrilization. Considering that the formation of amyloid oligomers leads to cytotoxicity, the development of chemical compounds that are able to effectively cross the blood-brain barrier (BBB) and inhibit this conversion to oligomers and/or fibrils is essential for neurodegenerative disease therapy. We previously reported that pyrroloquinoline quinone (PQQ) prevented aggregation and fibrillation of alpha-synuclein, amyloid beta(1-42) (A beta(1-42)), and mouse prion protein. To develop a novel drug against neurodegenerative diseases based on PQQ, it is necessary to improve the insufficient BBB permeability of PQQ. Here, we show that an esterified compound of PQQ, PQQ-trimethylester (PQQ-TME), has twice the BBB permeability than PQQ in vitro. Moreover, PQQ-TME exhibited greater inhibitory activity against fibrillation of alpha-synuclein, A beta(1-42), and prion protein. These results indicated that esterification of PQQ could be a useful approach in developing a novel PQQ-based amyloid inhibitor.
  2018年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 9, 12, 1948-7193, DOI(公開)(r-map), 2898, 2903
• Engineering the hinge region of human IgG1 Fc-fused bispecific antibodies to improve fragmentation resistance
  Suzuki, Saori; Annaka, Hiroaki; Konno, Shota; Kumagai, Izumi; Asano, Ryutaro
  SCIENTIFIC REPORTS
  NATURE PUBLISHING GROUP
  Fc domain fusion can improve the therapeutic effects of relatively small biological molecules such as peptides, cytokines, and antibody fragments. Fc fusion proteins can also be used to enhance the cytotoxic effects of small bispecific antibodies (bsAbs). However, fragmentation of Fc fusion proteins, which mainly occurs around the hinge regions during production, storage, and circulation in the blood, is a major issue. In this study, we first investigated the mechanisms of fragmentation around the hinge region during storage using Fc-fused bsAbs with specificity for epidermal growth factor receptor and CD3 as a model. The fragmentation peaks generated by gel filtration analysis indicated that both contaminating proteases and dissolved active oxygen should be considered causes of fragmentation. We designed and constructed variants by introducing a point mutation into the upper hinge region, which reduced the cleavage caused by dissolved active oxygen, and shortened the hinge region to restrict access of proteases. These hinge modifications improved fragmentation resistance and did not affect the biological activity of the bsAbs in vitro. We confirmed the versatility of the hinge modifications using another Fc-fused bsAb. Our results show that hinge modifications to the Fc fusion protein, especially the introduction of a point mutation into the upper hinge region, can reduce fragmentation substantially, and these modifications can be used to improve the fragmentation resistance of other recombinant Fc fusion proteins.
  2018年11月22日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 8, 2045-2322, DOI(公開)(r-map)
• A Designed L-Lactate Dehydrogenase Derived from L-Lactate Oxidase by Oxygen Accessible Pathway Engineering
  Hiraka, Kentaro; Kojima, Katsuhiro; Lin, Chi-En; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; Yoshida, Hiromi; La Belle, Jeffrey; Sode, Koji
  PROTEIN SCIENCE
  WILEY
  2018年11月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 27, 0961-8368, DOI(公開)(r-map), 137, 138
• Chemo-enzymatic Total Syntheses of Jorunnamycin A, Saframycin A, and N-Fmoc Saframycin Y3
  Tanifuji, Ryo; Koketsu, Kento; Takakura, Michiko; Asano, Ryutaro; Minami, Atsushi; Oikawa, Hideaki; Oguri, Hiroki
  JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
  AMER CHEMICAL SOC
  The antitumor tetrahydroisoquinoline (THIQ) alkaloids share a common pentacyclic scaffold that is biosynthesized by nonribosomal peptide synthetases involving unique enzymatic Pictet Spengler cyclizations. Herein we report concise and divergent chemoenzymatic total syntheses of THIQ alkaloids by merging precise chemical synthesis with in vitro engineered biosynthesis. A recombinant enzyme SfmC responsible for the biosynthesis of saframycin A was adapted for the assembly of these natural products and their derivatives, by optimizing designer substrates compatible with SfmC through chemical synthesis. The appropriately functionalized pentacyclic skeleton were efficiently synthesized by streamlining the linkage between SfmC-catalyzed multi-step enzymatic conversions and chemical manipulations of the intermediates to install aminonitrile and N-methyl groups. This approach allowed rapid access to the elaborated pentacyclic skeleton in a single day starting from two simple synthetic substrates without isolation of the intermediates. Further functional group manipulations allowed operationally simple and expeditious syntheses of jorunnamycin A, saframycin A, and N-Fmoc saframycin Y3 that could be versatile and common precursors for the artificial production of other antitumor THIQ alkaloids and their variants.
  2018年08月29日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 140, 34, 0002-7863, DOI(公開)(r-map), 10705, 10709
• Elucidation of the intra- and inter-molecular electron transfer pathways of glucoside 3-dehydrogenase
  Miyazaki, Ryota; Yamazaki, Tomohiko; Yoshimatsu, Keiichi; Kojima, Katsuhiro; Asano, Ryutaro; Sode, Koji; Tsugawa, Wakako
  BIOELECTROCHEMISTRY
  ELSEVIER SCIENCE SA
  Glucoside 3 dehydrogenase (G3DH) is a flavin adenine dinucleotide (FAD)-containing oxidoreductase that catalyzes the oxidation of the hydroxy group on the C-3 position of pyranose and shows broad substrate specificity by oxidizing many saccharides. Due to unique site specificity and wide substrate specificity, G3DHs can be used for synthesis of sugar derivatives, anodic catalysis in biofuel cells, multi-sugar analysis using enzyme electrode, and for enzymatic detection of 1,5 anhydro D glucitol, a clinical marker for diabetes. However, few studies have focused on the fundamental biochemical properties of G3DH, including its electron transfer pathway. In this study, we isolated the G3DH gene from Rhizobium radiobacter, a homologue of marine bacterial G3DH, and reported that the isolated gene fragment contains the genes encoding the G3DH catalytic subunit (subunit I), G3DH hitch-hiker subunit (subunit II), and cytochrome c-like molecule (CYTc). Furthermore, we report the recombinant expression of G3DH from R. radiobacter in Escherichia coli, the characterization of recombinant G3DH and the investigation of the molecular electron pathway of G3DH. We first prepared the G3DH subunit I-II complex using a co-expression vector for both subunits. The G3DH subunit I-II complex showed dye mediated G3DH activity toward methyl a D glucoside (MaG). Electron paramagnetic resonance (EPR) and inductively coupled plasma optical emission spectroscopy (ICP-OES) analyses revealed that subunit I contains an iron-sulfur cluster. We, then, prepared recombinant CYTc and revealed that it is capable of accepting electrons from the catalytic subunit of G3DH by absorption spectrum analysis. These results suggested that R. radiobacter G3DH possesses an iron sulfur cluster that may play an important role in the electron transfer from FAD to cytochrome c like molecule, which is an external electron acceptor of G3DH. Furthermore, we demonstrated that CYTc mediate the electron transfer from G3DH to electrode without the artificial electron mediator. (C) 2018 Elsevier B.V. All rights reserved.
  2018年08月, 研究論文（国際会議プロシーディングス）, 共同, 122, 1567-5394, DOI(公開)(r-map), 115, 122
• High-throughput cytotoxicity and antigen-binding assay for screening small bispecific antibodies without purification
  Sugiyama, Aruto; Umetsu, Mitsuo; Nakazawa, Hikaru; Niide, Teppei; Asano, Ryutaro; Hattori, Takamitsu; Kumagai, Izumi
  JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING
  SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN
  The cytotoxicity of T cell-recruiting antibodies with their potential to damage late-stage tumor masses is critically dependent on their structural and functional properties. Recently, we reported a semi-high-throughput process for screening highly cytotoxic small bispecific antibodies (i.e., diabodies). In the present study, we improved the high-throughput performance of this screening process by removing the protein purification stage and adding a stage for determining the concentrations of the diabodies in culture supernatant. The diabodies were constructed by using an Escherichia coli expression system, and each diabody contained tandemly arranged peptide tags at the C-terminus, which allowed the concentration of diabodies in the culture supernatant to be quantified by using a tag-sandwich enzymelinked immunosorbent assay. When estimated diabody concentrations were used to determine the cytotoxicity of unpurified antibodies, results comparable to those of purified antibodies were obtained. In a surface plasmon resonance spectroscopy-based target-binding assay, contaminants in the culture supernatant prevented us from conducting a quantitative binding analysis; however, this approach did allow relative binding affinity to be determined, and the relative binding affinities of the unpurified diabodies were comparable to those of the purified antibodies. Thus, we present here an improved high-throughput process for the simultaneous screening and determination of the binding parameters of highly cytotoxic bispecific antibodies. (C) 2018, The Society for Biotechnology, Japan. All rights reserved.
  2018年08月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 126, 2, 1389-1723, DOI(公開)(r-map), 153, 161
• Compact seahorse-shaped T cell-activating antibody for cancer therapy
  Fujii H., Tanaka Y., Nakazawa H., Sugiyama A., Manabe N., Shinoda A., Shimizu N., Hattori T., Hosokawa K., Sujino T., Niide T., Asano R., Kumagai I., Umetsu M.
  Adv. Ther.
  2018年07月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 1, 3, DOI(公開)(r-map), 1700031
• Minimizing the effects of oxygen interference on L-lactate sensors by a single amino acid mutation in Aerococcus viridans L-lactate oxidase
  Hiraka, Kentaro; Kojima, Katsuhiro; Lin, Chi-En; Tsugawa, Wakako; Asano, Ryutaro; La Belle, Jeffrey T.; Sode, Koji
  BIOSENSORS & BIOELECTRONICS
  ELSEVIER ADVANCED TECHNOLOGY
  L-lactate biosensors employing L-lactate oxidase (LOx) have been developed mainly to measure L-lactate concentration for clinical diagnostics, sports medicine, and the food industry. Some L-lactate biosensors employ artificial electron mediators, but these can negatively impact the detection of L-lactate by competing with the primary electron acceptor: molecular oxygen. In this paper, a strategic approach to engineering an AvLOx that minimizes the effects of oxygen interference on sensor strips was reported. First, we predicted an oxygen access pathway in Aerococcus viridans LOx (AvLOx) based on its crystal structure. This was subsequently blocked by a bulky amino acid substitution. The resulting Ala96Leu mutant showed a drastic reduction in oxidase activity using molecular oxygen as the electron acceptor and a small increase in dehydrogenase activity employing an artificial electron acceptor. Secondly, the Ala96Leu mutant was immobilized on a screen-printed carbon electrode using glutaraldehyde cross-linking method. Amperometric analysis was performed with potassium ferricyanide as an electron mediator under argon or atmospheric conditions. Under argon condition, the response current increased linearly from 0.05 to 0.5 mM L-lactate for both wild-type and Ala96Leu. However, under atmospheric conditions, the response of wild-type AvLOx electrode was suppressed by 9-12% due to oxygen interference. The Ala96Leu mutant maintained 56-69% of the response current at the same L-lactate level and minimized the relative bias error to 19% from 49% of wild-type. This study provided significant insight into the enzymatic reaction mechanism of AvLOx and presented a novel approach to minimize oxygen interference in sensor applications, which will enable accurate detection of L-lactate concentrations.
  2018年04月30日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 103, 0956-5663, DOI(公開)(r-map), 163, 170
• Affinity maturation of humanized anti-epidermal growth factor receptor antibody using a modified phage-based open sandwich selection method
  Sanada, Hideaki; Kobayashi, Kazuki; Oyama, Kenji; Maru, Takamitsu; Nakanishi, Takeshi; Umetsu, Mitsuo; Asano, Ryutaro; Kumagai, Izumi
  SCIENTIFIC REPORTS
  NATURE PUBLISHING GROUP
  Affinity maturation is one of the cardinal strategies for improving antibody function using in vitro evolutionary methods; one such well-established method is phage display. To minimise gene deletion, we previously developed an open sandwich (OS) method wherein selection was performed using only phage-displaying VH fragments after mixing with soluble VL fragments. The decrease in anti-EGFR antibody 528 affinity through humanization was successfully recovered by selecting VH mutants using this OS method. However, the affinity was not similar to that of parental 528. For further affinity maturation, we aimed to isolate VL mutants that act in synergy with VH mutants. However, the OS method could not be applied for selecting VL fragments because the preparation of soluble VH fragments was hampered by their instability and insolubility. Therefore, we initially designed a modified OS method based on domain-swapping of VH fragments, from added soluble Fv fragments to phagedisplaying VL fragments. Using this novel Fv-added OS selection method, we successfully isolated VL mutants, and one of the Fv comprising VH and VL mutants showed affinity almost equivalent to that of parental 528. This method is applicable for engineering other VL fragments for affinity maturation.
  2018年04月03日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 8, 2045-2322, DOI(公開)(r-map)
• Structural considerations for functional anti-EGFR × anti-CD3 bispecific diabodies in light of domain order and binding affinity
  Asano R., Nagai K., Makabe K., Takahashi K., Kumagai T., Kawaguchi H., Ogata H., Arai K., Umetsu M., Kumagai I.
  Oncotarget
  2018年02月14日, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 9, 17, DOI(公開)(r-map), 13884, 13893
• Comprehensive study of domain rearrangements of single-chain bispecific antibodies to determine the best combination of configurations and microbial host cells
  Asano, Ryutaro; Kuroki, Yuri; Honma, Sachiko; Akabane, Mihoko; Watanabe, Shunsuke; Mayuzumi, Shinzo; Hiyamuta, Shuichi; Kumagai, Izumi; Sode, Koji
  MABS
  TAYLOR & FRANCIS INC
  Small bispecific antibodies (bsAbs) are important therapeutic molecules and represent the first bsAb format approved by the United States Food and Drug Administration. Diabody (Db), a small bsAb format, has four possible domain orders; we previously reported the differences in the expression levels and cancer growth inhibition effects upon rearranging the domain order of this format. However, there have been no comprehensive reports on domain rearrangements of bispecific single-chain Db (scDb) and tandem single-chain Fv (taFv), which are widely used bsAb formats. In this study, we designed all possible domain orders for scDb and taFv (each with eight variants) with identical Fv pairs and individually expressed all 16 variants using Escherichia coli, Pichia pastoris, and Brevibacillus choshinensis. Comprehensive investigations showed that the intrinsic functions of the variants were similar to each other, regardless of the expression host system, but expression levels varied depending on the format as well as on the host cell. Among the 16 variants, we found a promising candidate that exhibited high activity and productivity. Furthermore, we determined that B. choshinensis is an attractive expression host because of its secretory production of recombinant proteins.
  2018年, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 10, 6, 1942-0862, DOI(公開)(r-map), 854, 863
• A semi high-throughput method for screening small bispecific antibodies with high cytotoxicity
  Sugiyama A., Umetsu M., Nakazawa H., Niide T., Onodera T., Hosokawa K., Hattori S., Asano R., Kumagai I.
  Sci. Rep.
  NATURE PUBLISHING GROUP
  Small bispecific antibodies that induce T-cell-mediated cytotoxicity have the potential to damage late-stage tumor masses to a clinically relevant degree, but their cytotoxicity is critically dependent on their structural and functional properties. Here, we constructed an optimized procedure for identifying highly cytotoxic antibodies from a variety of the T-cell-recruiting antibodies engineered from a series of antibodies against cancer antigens of epidermal growth factor receptor family and T-cell receptors. By developing and applying a set of rapid operations for expression vector construction and protein preparation, we screened the cytotoxicity of 104 small antibodies with diabody format and identified some with 10(3)-times higher cytotoxicity than that of previously reported active diabody. The results demonstrate that cytotoxicity is enhanced by synergistic effects between the target, epitope, binding affinity, and the order of heavy-chain and light-chain variable domains. We demonstrate the importance of screening to determine the critical rules for highly cytotoxic antibodies.
  2017年06月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 7, 1, 2045-2322, DOI(公開)(r-map), 2862
• 人工改変を駆使した高機能性次世代がん治療抗体の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  月刊ファインケミカル
  シーエムシー出版
  2017年02月15日, （MISC）総説・解説（商業誌）, 共同, 46, 2, 13, 18
• Generation of camelid VHH bispecific constructs via in-cell intein-mediated protein trans-splicing
  Shibuya, Yuki; Haga, Natsuki; Asano, Ryutaro; Nakazawa, Hikaru; Hattori, Takamitsu; Takeda, Daisuke; Sugiyama, Aruto; Kurotani, Reiko; Kumagai, Izumi; Umetsu, Mitsuo; Makabe, Koki
  Protein Eng. Des. Sel.
  OXFORD UNIV PRESS
  Production of various combinations of bispecific variable domain of heavy chain of heavy chain-only antibody (VHH) constructs to evaluate their therapeutic potential usually requires several gene-engineering steps. Here, we present an alternative method of creating bispecific VHH constructs in vivo through protein trans-splicing (PTS) reaction; this method may reduce the number of gene manipulation steps required. As a proof-of-concept, we constructed a bispecific antibody (bsAb) containing an anti-epidermal growth factor receptor VHH and anti-green fluorescent protein VHH, and we evaluated and confirmed its bispecificity. We also tested antibody labeling by fluorescent protein tagging using the PTS reaction. Compared with the conventional gene construction method, bsAb construction via PTS is a promising alternative approach for generating multiple bsAb combinations.
  2017年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 30, 1, 1741-0126, DOI(公開)(r-map), 15, 21
• 人工抗体の機能的構造形態に関する研究
  浅野竜太郎
  生化学
  2016年06月, 単独, 88, 4, 380, 385
• Anti-EGFR scFv tetramer (tetrabody) with a stable monodisperse structure, strong anticancer effect, and a long in vivo half-life
  Asano R., Koyama N., Hagiwara Y., Masakari Y., Orimo R., Arai K., Ogata H., Furumoto S., Umetsu M., Kumagai I.
  FEBS Open Bio
  2016年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 6, 6, 594, 602
• がん治療を目指した二重特異性抗体の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  細胞
  2016年04月, 共同, 48, 4, 8, 12
• 次世代がん治療薬を目指した低分子二重特異性抗体の開発と高機能化
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  酵素工学ニュース
  2016年04月, 共同, 75, 11, 14
• Organic crystal-binding peptides: morphology control and one-pot formation of protein-displaying organic crystals
  Niide T., Ozawa K., Nakazawa H., Oliveira D., Kasai H., Onodera M., Asano R., Kumagai I., Umetsu M.
  Nanoscale
  2015年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 7, 47, 20155, 20163
• 二重特異性抗体を用いたがん治療
  浅野竜太郎, 杉山在生人, 熊谷 泉
  細胞
  2015年12月, 共同, 47, 13, 50, 53
• 高機能な二重特異性抗体医薬の開発
  浅野竜太郎, 杉山在生人, 熊谷 泉
  バイオサイエンスとインダストリー
  2015年11月, 共同, 73, 6, 455, 461
• 二重特異性抗体のタンパク質工学を駆使した高機能化
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  YAKUGAKU ZASSHI
  2015年07月, 共同, 135, 7, 851, 856
• Rearranging the domain order of a diabody-based IgG-like bispecific antibody enhances its antitumor activity and improves its degradation resistance and pharmacokinetics
  Asano R., Shimomura I., Konno S., Ito A., Masakari Y., Orimo R., Taki S., Arai K., Ogata H., Okada M., Furumoto S., Onitsuka M., Omasa T., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Umetsu M., Kumagai I.
  MAbs
  2014年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 6, 5, 1243, 1254
• タンパク質工学を駆使した高機能性二重特異性抗体の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  生化学
  2014年08月, 共同, 86, 4, 469, 473
• Trehalose suppresses antibody aggregation during the culture of Chinese hamster ovary cells
  Onitsuka M., Tatsuzawa M., Asano R., Kumagai I., Shirai A., Maseda H., Omasa T.
  J. Biosci. Bioeng.
  2014年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 117, 5, 632, 638
• Glycosylation analysis of an aggregated antibody produced by Chinese hamster ovary cells in bioreactor culture
  Onitsuka M., Kawaguchi A., Asano R., Kumagai I., Honda K., Ohtake H., Omasa T.
  J. Biosci. Bioeng.
  2014年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 117, 5, 639, 644
• Generation of high-producing cell lines by overexpression of cell division cycle 25 homolog A in Chinese hamster ovary cells
  Lee K.H., Tsutsui T., Honda K., Asano R., Kumagai I., Ohtake H., Omasa T.
  J. Biosci. Bioeng.
  2013年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 116, 6, 754, 760
• Multimerization of anti-(epidermalgrowth factor receptor) IgG fragments induces an antitumor effect: the case for humanized 528 scFv multimers
  Asano R., Hagiwara Y., Koyama N., Masakari Y., Orimo R., Arai K., Ogata H., Furumoto S., Umetsu M., Kumagai I.
  FEBS J.
  2013年10月, 研究論文（大学，研究機関紀要）, 共同, 280, 19, 4816, 4826
• Domain order of a bispecific diabody dramatically enhances its antitumor activity beyond structural format conversion: the case of the hEx3 diabody
  Asano R., Kumagai T., Nagai K., Taki S., Shimomura I., Arai K., Ogata H., Okada M., Hayasaka F., Sanada H., Nakanishi T., Karvonen T., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Umetsu M., Kumagai I.
  Protein Eng. Des. Sel.
  2013年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 26, 5, 359, 367
• Development of an affinity-matured humanized anti-epidermal growth factor receptor antibody for cancer immunotherapy
  Nakanishi T., Maru T., Tahara K., Sanada H., Umetsu M., Asano R., Kumagai I.
  Protein Eng. Des. Sel.
  2013年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 26, 2, 113, 122
• A High-Affinity Gold-Binding Camel Antibody: Antibody Engineering for One-Pot Functionalization of Gold Nanoparticles as Biointerface Molecules
  Hattori T., Umetsu M., Nakanishi T., Sawai S., Kikuchi S., Asano R., Kumagai I.
  Bioconjug. Chem.
  2012年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 23, 9, 1934, 1944
• 進化する抗体医薬
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  リウマチ科
  2012年06月, 共同, 47, 6, 700, 706
• Enhancement of sialylation on humanized IgG-like bispecific antibody by overexpression of α2,6-sialyltransferase derived from Chinese hamster ovary cells
  Onitsuka M., Kim W.D., Ozaki H., Kawaguchi A., Honda K., Kajiura H., Fujiyama K., Asano R., Kumagai I., Ohtake H., Omasa T.
  Appl. Microbiol. Biotechnol.
  2012年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 94, 1, 69, 80
• A nanocluster design for the construction of artificial cellulosomes
  Kim D.M., Nakazawa H., Umetsu M., Matsuyama T., Ishida N., Ikeuchi A., Takahashi H., Asano R., Kumagai I.
  Catal. Sci. Technol.
  2012年03月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 2, 3, 499, 503
• Construction and humanization of a functional bispecific EGFR × CD16 diabody using a refolding system
  Asano R., Nakayama M., Kawaguchi H., Kubota T., Nakanishi T., Umetsu M., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  FEBS J.
  2012年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 279, 2, 223, 233
• タンパク質工学を駆使した次世代抗体医薬の創製
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  医工学治療
  2011年11月, 共同, 23, 3, 218, 223
• In vitro and in vivo antitumor effects of recombinant bispecific antibodies based on humanized anti-EGFR antibody
  Watanabe Y., Asano R., Arai K., Shimomura I., Ogata H., Kawaguchi H., Hayashi H., Ohtsuka H., Yoshida H., Katayose Y., Egawa S., Nakanishi T., Umetsu M., Yasui H., Ishida T., Imai K., Kudo T., Unno M., Kumagai I.
  Oncol. Rep.
  2011年10月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 26, 4, 949, 955
• Electrochemical detection of receptor-mediated endocytosis by scanning electrochemical microscopy
  Takahashi Y., Miyamoto T., Shiku H., Ino K., Yasukawa T., Asano R., Kumagai I., Matsue T.
  Phys. Chem. Chem. Phys.
  2011年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 13, 37, 16569, 16573
• 低分子抗体と抗体様スキャフォールドに基づく次世代抗体医薬の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  BIO INDUSTRY
  2011年06月, 共同, 28, 7, 22, 27
• 抗体医薬の大腸菌を用いた製造技術のあゆみ
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  PHARM TECH JAPAN
  2011年05月, 共同, 27, 6, 67, 73
• Mechanism of HSV infection through soluble adapter-mediated virus bridging to the EGF receptor
  Nakano K., Kobayashi M., Nakamura K., Nakanishi T., Asano R., Kumagai I., Tahara H., Kuwano M., Cohen J.B., Glorioso J.C.
  Virology
  2011年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 413, 1, 12, 18
• Enhancement of Cellulolytic Enzyme Activity by Clustering Cellulose Binding Domains on Nanoscaffolds
  Kim D.M., Umetsu M., Takai K., Matsuyama T., Ishida N., Takahashi H., Asano R., Kumagai I.
  Small
  2011年03月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 7, 5, 656, 664
• 高機能性次世代抗体医薬の分子設計
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  細胞
  2011年01月, 共同, 43, 1, 24, 28
• Cytotoxic Enhancement of a Bispecific Diabody by Format Conversion to Tandem Single-chain Variable Fragment (taFv) THE CASE OF THE hEx3 DIABODY
  Asano R., Ikoma K., Shimomura I., Taki S., Nakanishi T., Umetsu M., Kumagai I.
  J. Biol. Chem.
  2011年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 286, 3, 1812, 1818
• Highly Enhanced Cytotoxicity of a Dimeric Bispecific Diabody, the hEx3 Tetrabody
  Asano R., Ikoma K., Sone Y., Kawaguchi H., Taki S., Hayashi H., Nakanishi T., Umetsu M., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  J. Biol. Chem.
  2010年07月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 285, 27, 20844, 20849
• Integration of PEGylation and refolding for renaturation of recombinant proteins from insoluble aggregates produced in bacteria - Application to a single-chain Fv fragment
  Kumagai I., Asano R., Nakanishi T., Hashikami K., Tanaka S., Badran A., Sanada H., Umetsu M.
  J. Biosci. Bioeng.
  2010年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 109, 5, 447, 452
• Target cell-restricted apoptosis induction by 528scFv-TRAIL fusion protein specific for human EGFR and expressed in Escherichia coli
  Badran A., Asano R., Nakayama M., Watanabe Y., Nakanishi T., Umetsu M., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kumagai I.
  Int. J. Oncol.
  2010年05月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 36, 5, 1229, 1234
• Protein-protein interactions and selection: generation of molecule-binding proteins on the basis of tertiary structural information
  Umetsu M., Nakanishi T., Asano R., Hattori T., Kumagai I.
  FEBS J.
  2010年05月, 共同, 277, 9, 2006, 2014
• Glycosylation pattern of humanized IgG-like bispecific antibody produced by recombinant CHO cells
  Kim W.D., Tokunaga M., Ozaki H., Ishibashi T., Honda K., Kajiura H., Fujiyama K., Asano R., Kumagai I., Omasa T., Ohtake H.
  Appl. Microbiol. Biotechnol.
  2010年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 85, 3, 535, 542
• Application of the Fc fusion format to generate tag-free bi-specific diabodies
  Asano R., Ikoma K., Kawaguchi H., Ishiyama Y., Nakanishi T., Umetsu M., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  FEBS J.
  2010年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 277, 1, 477, 487
• 蛋白質発現：CHO 細胞
  浅野竜太郎
  蛋白質科学会アーカイブ
  2009年05月, 単独, 2, e050
• Electrochemical Detection of Epidermal Growth Factor Receptors on a Single Living Cell Surface by Scanning Electrochemical Microscopy
  Takahashi Y., Miyamoto T., Shiku H., Asano R., Yasukawa T., Kumagai I., Matsue T.
  Anal. Chem.
  2009年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 81, 7, 2785, 2790
• 次世代抗体医薬の分子設計
  熊谷 泉, 浅野竜太郎
  ケミカルエンジニヤリング
  2009年01月, 共同, 54, 1, 65, 71
• Preferential heterodimerization of a bispecific diabody based on a humanized anti-EGFR antibody 528
  Asano R., Sone Y., Ikoma K., Hayashi H., Nakanishi T., Umetsu M., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  Protein Eng. Des. Sel.
  2008年10月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 21, 10, 597, 603
• Diabody-based Recombinant Formats of Humanized IgG-like Bispecific Antibody With Effective Retargeting of Lymphocytes to Tumor Cells
  Asano R., Kawaguchi H., Watanabe Y., Nakanishi T., Umetsu M., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  J. Immunother.
  2008年10月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 31, 8, 752, 761
• リンパ球とがん細胞を認識するヒト型二重特異性抗体
  熊谷 泉, 浅野竜太郎
  Drug Delivery System
  2008年09月, 共同, 23, 5, 518, 525
• Thermodynamic Consequences of Mutations in Vernier Zone Residues of a Humanized Anti-human Epidermal Growth Factor Receptor Murine Antibody, 528.
  Makabe K., Nakanishi T., Tsumoto K., Tanaka Y., Kondo H., Umetsu M., Sone Y., Asano R., Kumagai I.
  J. Biol. Chem.
  2008年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 283, 2, 1156, 1166
• Grafting of material-binding function into antibodies Functionalization by peptide grafting
  Hattori T., Umetsu M., Nakanishi T., Tsumoto K., Ohara S., Abe H., Naito M., Asano R., Adschiri T., Kumagai I.
  Biochem. Biophys. Res. Commun.
  2008年01月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 365, 4, 751, 757
• High IL-21 receptor expression and apoptosis induction by IL-21 in follicular lymphoma
  Akamatsu N., Yamada Y., Hasegawa H., Makabe K., Asano R., Kumagai I., Murata K., Imaizumi Y., Tsukasaki K., Tsuruda K., Sugahara K., Atogami S., Yanagihara K., Kamihira S.
  Cancer Lett.
  2007年10月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 256, 2, 196, 206
• Highly Effective Recombinant Format of a Humanized IgG-like Bispecific Antibody for Cancer Immunotherapy with Retargeting of Lymphocytes to Tumor Cells
  Asano R., Watanabe Y., Kawaguchi H., Fukazawa H., Nakanishi T., Umetsu M., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  J. Biol. Chem.
  2007年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 282, 38, 27659, 27665
• Electrochemical Screening of Recombinant Protein Solubility in Escherichia coli Using Scanning Electrochemical Microscopy (SECM)
  Nagamine K., Onodera S., Kurihara A., Yasukawa T., Shiku H., Asano R., Kumagai I., Matsue T.
  Biotechnol. Bioeng.
  2007年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 96, 5, 1008, 1013
• Humanization of the Bispecific Epidermal Growth Factor Receptor x CD3 Diabody and Its Efficacy as a Potential Clinical Reagent
  Asano R., Sone Y., Makabe K., Tsumoto K., Hayashi H., Katayose Y., Unno M., Kudo T., Kumagai I.
  Clin. Cancer Res.
  2006年07月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 12, 13, 4036, 4042
• 抗EGFレセプター・抗CD3二重特異性抗体の抗腫瘍作用
  熊谷 泉, 林 洋毅, 浅野竜太郎
  臨床免疫
  2006年05月, 共同, 45, 5, 497, 502
• 二重特異性抗体構築の歴史と，がん免疫療法への応用に向けた現状と展望 (ミニレビュー)
  浅野竜太郎
  生化学
  2005年12月, 単独, 77, 12, 1497, 1501
• Herpes Simplex Virus Targeting to the EGF Receptor by a gD-Specific Soluble Bridging Molecule.
  Nakano K., Asano R., Tsumoto K., Kwon H., Goins W.F., Kumagai I., Cohen J.B., Glorioso J.C.
  Mol. Ther.
  2005年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 11, 4, 617, 626
• Tumor-directed lymphocyte-activating cytokines: refolding-based preparation of recombinant human interleukin-12 and an antibody variable domain-fused protein by additive-introduced stepwise dialysis.
  Makabe K., Asano R., Ito T., Tsumoto K., Kudo T., Kumagai I.
  Biochem. Biophys. Res. Commun.
  2005年03月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 328, 1, 98, 105
• 上皮増殖因子受容体シグナルの抑制効果をもつ新規二重特異性抗体を用いた養子免疫療法
  林 洋毅, 浅野竜太郎, 海野倫明
  消化器科
  2004年11月, 共同, 39, 5, 522, 530
• 抗体療法－最近の進歩、概論: 抗体療法の進歩－臨床応用への期待
  浅野竜太郎, 津本浩平, 熊谷 泉
  医学のあゆみ
  2004年11月, 共同, 211, 7, 723, 727
• A highly effective and stable bispecific diabody for cancer immunotherapy: cure of xenografted tumors by bispecific diabody and T-LAK cells
  Hayashi H., Asano R., Tsumoto K., Katayose Y., Suzuki M., Unno M., Kodama H., Takemura S., Yoshida H., Makabe K., Imai K., Matsuno S., Kumagai I., Kudo T.
  Cancer Immunol. Immunother.
  2004年06月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 53, 6, 497, 509
• A novel adenovirus expressing human 4-1BB ligand enhances antitumor immunity
  Yoshida H., Katayose Y., Unno M., Suzuki M., Kodama H., Takemura S., Asano R., Hayashi H., Yamamoto K., Matsuno S., Kudo T.
  Cancer Immunol. Immunother.
  2003年02月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 52, 2, 97, 106
• Efficient Construction of a Diabody Using a Refolding System: Anti-Carcinoembryonic Antigen Recombinant Antibody Fragment.
  Asano R., Kudo T., Nishimura Y., Makabe K., Hayashi H., Suzuki M., Tsumoto K., Kumagai I.
  J. Biochem.
  2002年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 132, 6, 903, 909
• Antitumor activity of interleukin-21 prepared by novel refolding procedure from inclusion bodies expressed in Escherichia coli
  Asano R., Kudo T., Makabe K., Tsumoto K., Kumagai I.
  FEBS Lett.
  2002年09月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 528, 1-3, 70, 76
• Inhibition of hepatitis C virus NS3 protease by peptides derived from complementarity-determining regions (CDRs) of the monoclonal antibody 8D4: tolerance of a CDR peptide to conformational changes of a target
  Tsumoto K., Misawa S., Ohba Y., Ueno T., Hayashi H., Kasai N., Watanabe H., Asano R., Kumagai I.
  FEBS Lett.
  2002年08月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 525, 1-3, 77, 82
• Selection of human antibody fragments on the basis of stabilization of the variable domain in the presence of target antigens
  Watanabe H., Tsumoto K., Asano R., Nishimiya Y., Kumagai I.
  Biochem. Biophys. Res. Commun.
  2002年07月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 295, 1, 31, 36
• Specific and effective targeting cancer immunotherapy with a combination of three bispecific antibodies
  Kodama H., Suzuki M., Katayose Y., Shinoda M., Sakurai N., Takemura S., Yoshida H., Saeki H., Asano R., Ichiyama M., Imai K., Hinoda Y., Matsuno S., Kudo T.
  Immunol. Lett.
  2002年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 81, 2, 99, 106
• A mutated superantigen SEA D227A fusion diabody specific to MUC1 and CD3 in targeted cancer immunotherapy for bile duct carcinoma
  Takemura S., Kudo T., Asano R., Suzuki M., Tsumoto K., Sakurai N., Katayose Y., Kodama H., Yoshida H., Ebara S., Saeki H., Imai K., Matsuno S., Kumagai I.
  Cancer Immunol. Immunother.
  2002年03月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 51, 1, 33, 44
• T-cell Immunotherapy for Human MK-1-expressing Tumors Using a Fusion Protein of the Superantigen SEA and Anti-MK-1 scFv Antibody
  Ueno A., Arakawa F., Abe H., Matsumoto H., Kudo T., Asano R., Tsumoto K., Kumagai I., Kuroki M., Kuroki M.
  Anticancer Res.
  2002年03月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 22, 2A, 769, 776
• Mutated SEA-D227A-conjugated antibodies greatly enhance antitumor activity against MUC1-expressing bile duct carcinoma
  Kodama H., Suzuki M., Katayose Y., Shinoda M., Sakurai N., Takemura S., Yoshida H., Saeki H., Ichiyama M., Tsumoto K., Asano R., Kumagai I., Imai K., Hinoda Y., Matsuno S., Kudo T.
  Cancer Immunol. Immunother.
  2001年12月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 50, 10, 539, 548
• Review – Second generation bispecific antibodies: Applications in cancer immunotherapy.
  Kudo T., Suzuki M., Takemura S., Asano R., Tsumoto K., Katayose Y., Shinoda M., Sakurai N., Kodama H., Ichiyama M., Yoshida H., Hayashi H., Saijyo S., Saito S., Takahashi J., Imai K., Kumagai I.
  Recent Res. Devel. Cancer.
  2001年01月, 共同, 3, 235, 255
• Construction of a diabody (small recombinant bispecific antibody) using a refolding system
  Takemura S., Asano R., Tsumoto K., Ebara S., Sakurai ., Katayose Y., Kodama H., Yoshida H., Suzuki M., Imai K., Matsuno S., Kudo T., Kumagai I.N
  Protein Eng.
  2000年08月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 13, 8, 583, 588
• Functional Fv fragment of an antibody specific for CD28: Fv-mediated co-stimulation of T cells
  Takemura S.*, Asano R.*, Tsumoto K., Arai T., Sakurai N., Kodama H., Yoshida H., Katayose Y., Suzuki M., Matsuno S., Kudo T., Kumagai I.
  FEBS Lett.
  2000年07月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 476, 3, 266, 271
• Functional Construction of the Anti-Mucin Core Protein (MUC1) Antibody MUSE11 Variable Regions in a Bacterial Expression System
  Asano R., Takemura S., Tsumoto K., Sakurai N., Teramae A., Ebara S., Katayose Y., Shinoda M., Suzuki M., Imai K., Matsuno S., Kudo T., Kumagai I.
  J. Biochem.
  2000年04月, 研究論文（学術雑誌）, 共同, 127, 4, 673, 679

著書

• Encyclopedia of Sensors and Biosensors
  Miura D., Asano R.
  Biosensors: Immunosensors
  Elsevier
  2023年01月01日, 9780128012383
• タンパク質のアモルファス凝集と溶解性-基礎研究からバイオ産業・創薬研究への応用まで-, 第III編 制御 第6章 巻き戻し法を用いた低分子抗体の調製
  浅野竜太郎
  シーエムシー出版
  2019年02月13日
• ドラッグデリバリーシステム-バイオ医薬品創成に向けた組織、細胞内、核内送達技術の開発-, 第13章 低分子がん治療抗体の開発とその高機能化および動態解析
  浅野竜太郎
  シーエムシー出版
  2018年06月27日
• 次世代医薬開発に向けた抗体工学の最前線, 第II編 抗体の改変技術 第7章 低分子抗体 1 タンパク質工学を駆使した低分子抗体の高機能化, 第8章 その他新機能抗体 1 二重特異性がん治療抗体の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  シーエムシー出版
  2012年12月
• 新機能抗体開発ハンドブック, 第1編 抗体開発技術-基礎 第2章 モノクローナル抗体 6節 大量調製-微生物, 第2編 抗体開発技術-実践 第2章 人工抗体 4節 二重特異性抗体
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  エヌ・ティー・エス
  2012年08月
• バイオ医薬品製造の効率化と生産基材の開発, 第Ⅲ編 微生物を用いた製造 第5章 低分子治療抗体の開発
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  シーエムシー出版
  2012年04月
• バイオ医薬の開発技術とシーズ, 第16章 がん免疫療法への応用研究を目指した抗体-diabody-
  浅野竜太郎, 熊谷 泉
  シーエムシー出版
  2009年03月
• 抗体医薬の最前線, 第1章 抗体ドメインの積み木細工による高機能化と医用への展開
  熊谷 泉, 浅野竜太郎, 中西 猛
  シーエムシー出版
  2007年07月
• 抗体エンジニアリングの最前線, 第1章 組換え型抗体の現状と展望
  浅野竜太郎, 津本浩平, 熊谷 泉
  シーエムシー出版
  2004年02月

研究発表、招待講演等

• 抗体工学が拓く次世代バイオ医薬品とバイオセンサー
  第48回セルセラピーセミナー
  2023年12月15日, 口頭発表（招待・特別）
• がん治療薬を指向したマルチバレント抗体の設計とバイオセンサへの展開
  第96回日本生化学会大会
  2023年10月31日, 口頭発表（招待・特別）
• 次世代バイオ医薬品を目指した低分子抗体の開発～低分子抗体の基礎と低分子二重特異性抗体の高機能化例～
  次世代抗体／バイオ医薬品にむけた 低分子抗体の技術的課題と開発・高機能化
  2022年12月13日, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
• Catcher/Tagを用いた簡便かつ汎用的なイムノセンシング素子の開発
  第32回日本MRS年次大会
  2022年12月06日, 口頭発表（招待・特別）
• タンパク質工学を駆使した多重特異性抗体の開発
  第74回日本生物工学会大会
  2022年10月19日, 口頭発表（招待・特別）
• 多重特異性抗体の開発トレンド
  JBA創薬モダリティ基盤研究会
  2022年07月05日, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
• 医薬品とセンシングを指向した人工抗体のデザイン
  東京農工大学―国立精神・神経医療研究センター 第6回合同シンポジウム
  2022年02月15日, シンポジウム・ワークショップ パネル（指名）
• 二重特異性抗体医薬の開発: これまでとこれから
  第37回日本DDS学会学術集会
  2021年06月30日, 口頭発表（招待・特別）
• 抗体工学の基礎と応用～抗体医薬品およびイムノセンサーの開発トレンドとこれらの開発に必要な知識と技術～
  BST講習会
  2019年12月06日, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
• 人工抗体の設計～がん治療からバイオセンシングへの展開～
  東京農工大学―国立精神・神経医療研究センター 第４回合同シンポジウム
  2018年05月30日, シンポジウム・ワークショップ パネル（指名）
• 抗体医薬品の課題と開発トレンド
  茨城県病院薬剤師セミナー
  2018年03月08日, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
• 低分子二重特異性がん治療抗体の開発と高機能化
  医薬産業政策研究所 政策研究 第1回ワークショップ
  2017年12月22日, シンポジウム・ワークショップ パネル（指名）
• 抗体工学の基礎 人工抗体の構造デザイン開発に必要な知識・技術・製品化応用
  BST講習会
  2017年09月20日, 公開講演，セミナー，チュートリアル，講習，講義等
• 低分子二重特異性がん治療抗体の機能的な構造
  第17回日本蛋白質科学会年会
  2017年06月22日, シンポジウム・ワークショップ パネル（指名）
• Design of a diabody-based IgG-like bispecific antibody with higher antitumor activity, degradation resistance, and long half-life
  The 29th Annual and International Meeting of Japanese Association for Animal Cell Technolog
  2016年11月12日, ポスター発表
• 次世代低分子がん治療抗体の開発
  日本薬物動態学会 第31回年会
  2016年10月15日, シンポジウム・ワークショップ パネル（指名）
• 低分子二重特異性がん治療抗体の大腸菌分泌発現と配向性の改変による高機能化低分子二重特異性がん治療抗体の大腸菌分泌発現と配向性の改変による高機能化
  酵素工学研究会　第76回講演会
  2016年10月07日, ポスター発表
• Fc融合体からのプロテアーゼを用いた低分子二重特異性がん治療抗体の調製
  酵素工学研究会　第76回講演会
  2016年10月07日, ポスター発表
• 抗EGFR抗体の多量体化に伴うチロシンキナーゼ阻害活性と抗腫瘍効果の向上
  酵素工学研究会　第76回講演会
  2016年10月07日, ポスター発表
• 次世代がん治療薬を目指した二重特異性抗体の構造最適化
  若手研究者フォーラム2016 次世代バイオ医薬・再生医療を支える基盤技術開発
  2016年07月26日, 口頭発表（招待・特別）
• Effects of rearranging the domain order of a diabody-based IgG-like bispecific antibody on antitumor activity, degradation resistance, and pharmacokinetics
  The 30th Anniversary Symposium of the Protein Society
  2016年07月16日, ポスター発表
• がん細胞とリンパ球の架橋を目指した二重特異性抗体の高機能化
  第32回日本DDS学会学術集会
  2016年06月30日, 口頭発表（招待・特別）
• NK 細胞を標的とした低分子二重特異性抗体の機能的な形態
  第16回日本蛋白質科学会年会
  2016年06月09日, ポスター発表
• ELISA 法との組合せによる未精製抗体の定量的薬効・蛋白質間相互作用スクリーニング
  第16回日本蛋白質科学会年会
  2016年06月08日, ポスター発表
• 蛋白質トランススプライシングを用いた小型二重特異性抗体の構築と抗体の蛍光ラベル化
  第16回日本蛋白質科学会年会
  2016年06月08日, ポスター発表
• 次世代二重特異性がん治療抗体の開発
  バイオファーマジャパン2016
  2016年04月22日, 口頭発表（招待・特別）
• 次世代抗体の課題と挑戦(1)：高機能な二重特異性抗体の開発
  第14期 バイオファイナンスギルド 第7回セミナー
  2016年02月12日, 口頭発表（基調）
• がん治療を目指した二重特異性抗体の機能的構造形態
  第20回 生体材料融合研究会
  2016年01月27日, 口頭発表（基調）
• 抗体医薬品開発の最前線: トレンドと課題
  福島県病院薬剤師会 1月福島支部学術講演会
  2016年01月20日, 口頭発表（基調）
• Construction of a bispecific antibody via protein trans-splicing
  Pacifichem 2015
  2015年12月20日, その他
• Structural control and visualization of a smart bispecific and bivalent antibody
  Pacifichem 2015
  2015年12月20日, その他
• High throughput screening of cancer therapeutic small antibody designed from domain library
  Pacifichem 2015
  2015年12月20日, その他
• 人工抗体の機能的構造形態に関する研究
  BMB2015 第38回日本分子生物学会年会・第88回日本生化学会大会 合同大会
  2015年12月03日, その他
• Diabody型二重特異性抗体の構築におけるアミノ酸配列相同性の影響
  BMB2015 第38回日本分子生物学会年会・第88回日本生化学会大会 合同大会
  2015年12月01日, ポスター発表
• がん治療低分子抗体の迅速スクリーニングを利用した高活性ルールの抽出
  第67回日本生物工学会大会
  2015年10月27日, ポスター発表
• アミノ酸配列の相同性から考察するDiabody型二重特異性抗体の構造均一性
  第67回日本生物工学会大会
  2015年10月27日, ポスター発表
• Fc融合型二重特異性抗体の安定性の向上を目指したヒンジ領域の設計
  第67回日本生物工学会大会
  2015年10月27日, ポスター発表
• 抗体医薬品開発の課題とトレンド
  Biologics Expert Meeting in Hokkaido
  2015年10月17日, 口頭発表（基調）
• Development of bispecific antibodies for cancer therapy using protein engineering
  The 1st International Symposium on Drug Discovery from Bioresources
  2015年09月18日, 口頭発表（招待・特別）
• Highly Cytotoxic Therapeutic Antibody Identified from High Throughput Screening
  2015 ISCPT
  2015年09月07日, その他
• 抗体医薬品開発の現状と展望 ～タンパク質工学の寄与～
  第176回 熊本県病院薬剤師会研修会
  2015年09月05日, 口頭発表（基調）
• 抗体医薬品開発の現状と展望: 二重特異性抗体医薬品の開発に向けた挑戦
  Biologics Seminar for Pharmacist in Yamagata
  2015年09月03日, 口頭発表（基調）
• What are critical factors for highly cytotoxic smart antibody ?
  Tohoku University's chemistry Summer School 2015
  2015年08月27日, 口頭発表（基調）
• がん細胞成長阻害活性を有する四量体化抗EGFR一本鎖抗体の機能評価
  GE Life Sciences Day 2015
  2015年07月24日, ポスター発表
• ヒンジ領域改変によるFc融合型二重特異性抗体の安定性向上および機能評価
  GE Life Sciences Day 2015
  2015年07月24日, ポスター発表
• 抗体医薬品開発の現状と展望: 二重特異性人工抗体を中心に
  Biologics seminar on RA
  2015年07月23日, 口頭発表（基調）
• CHO細胞培養における非天然型抗体の凝集性解析
  第15回日本蛋白質科学会年会
  2015年06月25日, ポスター発表
• 最適な二重特異性低分子抗体を構成する抗体断片の迅速スクリーニング
  第15回日本蛋白質科学会年会
  2015年06月25日, ポスター発表
• シングルドメインを利用した二重二価がん治療抗体BibiAnの会合特性と構造解析
  第15回日本蛋白質科学会年会
  2015年06月25日, ポスター発表
• がん細胞成長阻害活性を有する四量体化抗EGFR一本鎖抗体の調製と機能評価
  第15回日本蛋白質科学会年会
  2015年06月24日, ポスター発表
• 抗体医薬品開発の現状と課題 : 次世代人工抗体の可能性
  Biologics Seminar in Chiba
  2015年04月14日, 口頭発表（基調）
• 抗体医薬品開発の現状と展望 : 次世代人工抗体の開発に向けた挑戦
  Infliximab Meeting
  2015年03月30日, 口頭発表（基調）
• ドメインライブラリー的発想によるがん治療スマート抗体の迅速設計スクリーニング
  日本化学会第95春季年会
  2015年03月26日, その他
• ドメインライブラリー的発想によるがん治療二重特異性抗体の高活性ルール抽出
  化学工学会第79年会
  2015年03月21日, その他
• 抗体医薬品開発の現状と次世代人工抗体の可能性
  Biologics Seminar for Pharmacist in Sendai
  2015年03月17日, 口頭発表（基調）
• Fc融合二重特異性抗体のドメイン組換えによるin vivo抗腫瘍効果の増強
  平成26年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ
  2015年02月06日, ポスター発表
• 低分子二重特異性二価抗体(BibiAn)のin vivo抗腫瘍効果
  平成26年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ
  2015年02月06日, ポスター発表
• がん治療スマート抗体の迅速設計を指向したスクリーニング法開発と活性ルール抽出
  第37回日本分子生物学会年会
  2014年11月25日, ポスター発表
• scFv二価設計にラクダ由来VHHシングルドメイン構造をかけ合わせたスマート二重二価抗体: BibiAn
  第37回日本分子生物学会年会
  2014年11月25日, ポスター発表
• 異なる抗体クローン用いて作製した低分子二重特異性抗体の比較検討
  第87回日本生化学会大会
  2014年10月18日, ポスター発表
• 抗体医薬開発の現状と展望: 次世代人工抗体を中心に
  第47回日本薬剤師会学術大会学会
  2014年10月12日, 口頭発表（基調）
• 無機基板表面を標的としたラクダ抗体から着想するスマートなバイオセンサー仕様抗体の設計
  第52回生物物理学会年会
  2014年09月26日, ポスター発表
• 表面プラズモン励起増強チップに最適な検出抗体のスマート設計
  第8回バイオ関連シンポジウム
  2014年09月12日, その他
• がん細胞成長阻害活性を有する多量体化抗EGFR一本鎖抗体の精密機能解析
  第66回日本生物工学会大会
  2014年09月11日, ポスター発表
• 抗体断片群からの迅速な二重特異性低分子抗体の調製と活性ルール抽出
  第66回日本生物工学会大会
  2014年09月11日, ポスター発表
• スマート二重二価抗体: 抗体可変領域からの新規デザイン
  第8回バイオ関連シンポジウム
  2014年09月11日, ポスター発表
• 表面プラズモン励起増強チップに最適な検出抗体のスマート設計
  第8回バイオ関連シンポジウム
  2014年09月11日, その他
• がん治療スマート抗体の迅速設計を目指したスクリーニング法の開発
  平成26年度 がん若手研究者ワークショップ
  2014年09月05日, ポスター発表
• Cytotoxic enhancement of a bispecific diabody with specificity for EGFR and CD3 by rearranging a domain order
  FEBS-EMBO 2014
  2014年09月01日, ポスター発表
• Find out the most effective bispecific antibody for cancer therapy by High throughput
  Tohoku University's Chemistry Summer School 2014
  2014年08月25日, ポスター発表
• Design of smart antibody with bispecific and bivalent function by fusing single camel antigen-binding fragment onto dimerized single-chain Fv
  248th ACS National Meeting & Exposition
  2014年08月12日, ポスター発表
• Convenient antibody design for plasmonic biosensor using camel antibody with affinity for inorganic material
  248th ACS National Meeting & Exposition4
  2014年08月12日, ポスター発表
• High throughput screening of the effective bispecific antibodies for cancer therapy
  248th ACS National Meeting & Exposition
  2014年08月12日, ポスター発表
• 低分子二重特異性抗体の配向性の違いがおよぼすFc融合体の機能への影響
  GE Life Sciences Day 2014
  2014年08月01日, ポスター発表
• 無機基板を抗原としたラクダ抗体から発想するバイオセンサー指向二重特異性抗体の設計
  生体機能関連化学部会若手の会 第26回サマースクール
  2014年07月25日, ポスター発表
• 抗体可変領域断片の会合特性から発想する天然型よりスマートかつ高機能な抗体設計
  生体機能関連化学部会若手の会 第26回サマースクール
  2014年07月25日, ポスター発表
• 最適な二重特異性低分子抗体を構成する抗体断片の迅速スクリーニング
  第14回日本蛋白質科学会年会
  2014年06月26日, ポスター発表
• 無機基板を抗原としたラクダ抗体から発想するバイオセンサー指向インターフェイス設計
  第14回日本蛋白質科学会年会
  2014年06月26日, ポスター発表
• 一本鎖抗体の自発的二量体化から発想するラクダ可変領域シングルドメインを利用した多重多価抗体
  第14回日本蛋白質科学会年会
  2014年06月25日, ポスター発表
• 低分子二重特異性抗体の配向性の違いがもたらすFc融合体の機能への影響
  第14回日本蛋白質科学会年会
  2014年06月25日, ポスター発表
• 低分子二重特異性がん治療抗体の機能的な構造形態に関する実験的考察
  第41回生体分子化学討論会
  2014年06月06日, その他
• ヒト上皮増殖因子受容体を標的とした多価抗体の開発
  化学療法基盤支援活動第3回シンポジウム
  2014年05月12日, ポスター発表
• 多角的視点からの低分子二重特異性がん治療抗体の高機能化デザイン
  日本生化学会東北支部 第80回例会・シンポジウム
  2014年05月10日, その他
• 二重特異性抗体のタンパク質工学を駆使した高機能化
  日本薬学会第134年会
  2014年03月30日, 口頭発表（招待・特別）
• 一本鎖抗体の自発的二量体化から発想するラクダ可変領域シングルドメインを利用した多重特異性多価抗体
  日本化学会第94春季年会
  2014年03月27日, ポスター発表
• 一本鎖抗体の自己会合特性を活かした多価・多重特異性抗体設計
  化学工学会第79年会
  2014年03月20日, その他
• 低分子二重特異性がん治療抗体の網羅的な作製と機能評価
  平成25年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ
  2014年02月18日, ポスター発表
• 高親和性化低分子二重特異性がん治療抗体のin vivo抗腫瘍効果
  平成25年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ
  2014年02月18日, ポスター発表
• 低分子二重特異性がん治療抗体のドメイン組換えによるin vivo抗腫瘍効果の増強
  平成25年度「個体レベルでのがん研究支援活動」ワークショップ
  2014年02月18日, ポスター発表
• A bispecific and bivalent smart antibody: spontaneous dimerization of scFv with single camel VHH fused
  Korea-Japan Smart Biodesign Workshop
  2014年01月21日, ポスター発表
• Potent anti-tumor effect of small bispecific antibodies built from high affinity mutants
  Korea-Japan Smart Biodesign Workshop
  2014年01月21日, ポスター発表
• Multivalent antibodies fabrication in E.coli with multimeric proteins
  Korea-Japan Smart Biodesign Workshop
  2014年01月21日, ポスター発表
• Development of a screening method for optimal antibody fragment pairs to construct effective small bispecific antibodies
  Korea-Japan Smart Biodesign Workshop
  2014年01月21日, ポスター発表
• Design of bispecific molecules for biosensor using camel antibody binding to ZnO surface
  Korea-Japan Smart Biodesign Workshop
  2014年01月21日, ポスター発表
• Protein engineering for site-specific bioconjugation chemistry: Construction of multiple functional low-molecular antibodies
  Antibody Engineering & Therapeutics
  2013年12月09日, ポスター発表
• Self-assembly system in E.coli for generating multivalent antibody
  Antibody Engineering & Therapeutics
  2013年12月09日, ポスター発表
• Small bispecific antibodies built from high affinity Fv mutants for founctional enhancement
  Antibody Engineering & Therapeutics
  2013年12月09日, ポスター発表
• Fc融合二重特異性がん治療抗体の配向性の検討と親和性向上による高機能化
  第65回日本生物工学会大会
  2013年09月20日, ポスター発表
• Construction of small bispecific antibody mutants with enhanced anti-tumor activity
  isCEBT2013
  2013年09月09日, ポスター発表
• In vivo assembly design: multivalent antibody generation
  isCEBT2013
  2013年09月09日, ポスター発表
• Design of bispecific interface molecules for biosensor utilizing camel antibody with affinity for ZnO surface
  isCEBT2013
  2013年09月09日, ポスター発表
• 高親和性変異の導入による低分子型二重特異性がん治療抗体の高機能化
  がん若手研究者ワークショップ
  2013年09月05日, ポスター発表
• Functional enhancement of a small bispecific antibody using high affinity Fv mutants isolated by phage display
  ICSG2013-SLS
  2013年08月01日, ポスター発表
• Development of a screening method for optimal antibody fragment pairs to construct effective small bispecific antibodies
  ICSG2013-SLS
  2013年08月01日, ポスター発表
• Cytotoxic enhancement of a small bispecific antibody with specificity for EGFR and CD3 by rearranging a domain order
  ICSG2013-SLS
  2013年08月01日, ポスター発表
• Novel design with multimeric proteins for multivalent antibodies expressed in E.coli
  ICSG2013-SLS
  2013年07月30日, ポスター発表
• Design of interface molecules for biosensor using camel antibody with affinity for target inorganic material
  ICSG2013-SLS
  2013年07月30日, ポスター発表
• タンパク質工学に基づく次世代がん治療抗体の創製と機能解析
  GE Life Sciences Day 2013
  2013年07月03日, 口頭発表（招待・特別）
• EGFRとCD16を標的としたヒト型化低分子二重特異性抗体の巻き戻し法を用いた開発
  第13回日本蛋白質科学会年会
  2013年06月14日, ポスター発表
• 無機材料標的ラクダ抗体を錨としたバイオセンサー指向インターフェイス設計
  第13回日本蛋白質科学会年会
  2013年06月12日, ポスター発表
• IgG様がん治療二重特異性抗体の高機能化を目指した配向性の検討と変異導入
  第35回日本分子生物学会年会
  2012年12月14日, その他
• 高活性多量体化低分子二重特異性抗体の精密機能解析
  第35回日本分子生物学会年会
  2012年12月14日, ポスター発表
• 低分子二重特異性抗体の機能的配向性に関する実験的考察
  第35回日本分子生物学会年会
  2012年12月14日, ポスター発表
• 多量体タンパク質を利用した多価抗体分子の積み木細工的デザイン
  第35回日本分子生物学会年会
  2012年12月14日, ポスター発表
• タンパク質工学を駆使した高機能性がん治療人工抗体の創製
  第9回 稲盛フロンティア研究セミナー
  2012年12月12日, 口頭発表（招待・特別）
• Cytotoxic Enhancement of a Bispecific Diabody by Format Conversion to Tandem Single-chain Variable Fragment
  Antibody Engineering & Antibody Therapeutics 2012
  2012年12月03日, ポスター発表
• LEGO design for multivalent antibodies expressed in E.coli
  YABEC2012
  2012年10月27日, ポスター発表
• Functional enhancement of a small recombinant bispecific antibody by introduction of mutations for cancer immunotherapy
  YABEC 2012
  2012年10月27日, ポスター発表
• 第64回日本生物工学会大会
  多量体化がん治療抗EGFR一本鎖抗体の高機能化に向けた検討
  2012年10月26日, その他
• EGFRとCD3を標的とした二重特異性diabodyのドメイン組換えによる細胞傷害活性の増強
  第71回日本癌学会学術総会
  2012年10月19日, その他
• 高活性クラスター化低分子二重特異性抗体の精密機能解析
  BIA Symposium 2012
  2012年07月20日, ポスター発表
• VL変異導入ライブラリとファージ提示法を用いたヒト型化抗EGFR抗体の親和性向上
  BIA Symposium 2012
  2012年07月20日, ポスター発表
• 低分子がん治療二重特異性抗体の機能の向上を目指した変異導入と機能評価
  生物工学会若手研究者の集い 夏のセミナー 2012
  2012年06月30日, ポスター発表
• 多量体タンパク質を核とした低分子タンパク質のクラスター化設計
  生物工学会若手研究者の集い 夏のセミナー 2012
  2012年06月30日, ポスター発表
• VL変異導入ライブラリとファージ提示法を用いたヒト型化抗EGFR抗体の高親和性化
  第12回日本蛋白質科学会年会
  2012年06月22日, ポスター発表
• 大腸菌提示法を用いた一本鎖抗体の高親和性化
  第12回日本蛋白質科学会年会
  2012年06月22日, ポスター発表
• タンパク質工学的視点からのピンポイント化学接合デザイン
  第12回日本蛋白質科学会年会
  2012年06月22日, ポスター発表
• ディアボディ型低分子二重特異性抗体の変異導入による高機能化
  第34回日本分子生物学会年会
  2011年12月13日, その他
• ピンポイント化学接合をデザインしたPEG化二重特異性抗体の作製と機能評価
  第34回日本分子生物学会年会
  2011年12月13日, その他
• 高機能性二重特異性抗体の作製に向けた部位指定化学接合デザイン
  第34回日本分子生物学会年会
  2011年12月13日, その他
• 多量体化がもたらす抗EGFR一本鎖抗体のin vivo抗腫瘍効果
  第70回日本癌学会学術総会
  2011年10月05日, その他
• 低分子二重特異性抗体の機能的構造形態に関する実験的考察
  第84回日本生化学会大会
  2011年09月23日, その他
• Next Generation Protein Therapeutics Summit
  Characterization of dimeric bispecific diabody (tetrabody) with highly enhanced cytotoxicity
  2011年06月20日, ポスター発表
• タンパク質工学的視点からの部位特異的化学接合の設計
  第11回日本蛋白質科学会年会
  2011年06月08日, ポスター発表
• タンパク質工学的視点からの部位特異的化学接合の設計：PEG化二重特異性抗体への応用
  第11回日本蛋白質科学会年会
  2011年06月08日, ポスター発表
• 多量体化抗EGFR一本鎖抗体のin vivo機能解析と高機能化
  第11回日本蛋白質科学会年会
  2011年06月08日, ポスター発表
• タンパク質工学を駆使した次世代型がん治療抗体の創製
  日本医工学治療学会第27回学術大会
  2011年04月23日, 口頭発表（招待・特別）
• 抗オートタキシンモノクローナル抗体のヒトキメラ化
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月09日, ポスター発表
• Nanoclustering of endoglulcases for artificial design of cellulosomes
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月09日, ポスター発表
• ピンポイント化学接合をデザインした二重特異性分子抗体
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, その他
• ピンポイント化学接合が可能なタンパク質工学的抗体デザイン
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, ポスター発表
• 低分子抗体の多機能化を目指したピンポイント化学接合デザイン
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, ポスター発表
• PEG化二重特異性低分子抗体の作製と機能評価
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, ポスター発表
• 構造フォーマットの変換による低分子二重特異性抗体の最適化
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, その他
• IgG様二重特異性抗体の構造改変と変異導入による高機能化
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, ポスター発表
• がん細胞増殖抑制効果を発揮する多量体化抗EGFR一本鎖抗体の開発
  BMB2010 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  2010年12月07日, ポスター発表
• ドメイン組換えによる低分子二重特異性抗体の高機能化
  第62回日本生物工学会大会
  2010年10月29日, ポスター発表
• 各種解析法を用いた低分子がん治療抗体の機能・構造評価
  GEヘルスケア・ジャパンセミナー BIA Symposium in 仙台
  2010年10月26日, 口頭発表（招待・特別）
• EGFRを標的としたdiabody型二重特異性抗体のドメイン組換えによる高機能化
  第69回日本癌学会学術総会
  2010年10月24日, ポスター発表
• Highly enhanced cytotoxicity of a dimeric bispecific diabody, the humanized EGFR x CD3 tetrabody
  PEGS Summit Europe 2010
  2010年10月05日, ポスター発表
• IgG様二重特異性抗体の機能向上に向けた検討
  第4回バイオ関連化学シンポジウム
  2010年09月25日, その他
• タンパク質工学的発想のピンポイント化学接合デザイン：低分子多価抗体を例に
  第4回バイオ関連化学シンポジウム
  2010年09月25日, その他
• ドメイン組換えに基づく次世代治療抗体創製に向けて
  第10回日本蛋白質科学会年会
  2010年06月17日, 口頭発表（招待・特別）
• 結晶構造情報とファージ提示法に基づくヒト型化抗EGFR抗体の高親和性化
  第10回日本蛋白質科学会年会
  2010年06月16日, ポスター発表
• 小山典明, 萩原康世, 浅野竜太郎, 熊谷 泉
  第10回日本蛋白質科学会年会
  2010年06月16日, ポスター発表
• ディアボディ型二重特異性抗体のドメイン組換えによる高機能化
  第10回日本蛋白質科学会年会
  2010年06月16日, ポスター発表
• PEG化による二重特異性低分子抗体の機能変化
  第10回日本蛋白質科学会年会
  2010年06月16日, ポスター発表
• Affinity maturation of the humanized anti-EGFR antibody fragment based on structural information and phage display system
  第32回日本分子生物学会年会
  2009年12月09日, ポスター発表
• ヒト型化IgG様二重特異性抗体の高機能化に向けた検討
  第32回日本分子生物学会年会
  2009年12月09日, ポスター発表
• The effect of domain order on function of bispecific diabody
  第32回日本分子生物学会年会
  2009年12月09日, ポスター発表
• The design of PEGylated multivalent antibodies for convenient preparation from insoluble aggregates produced in bacteria
  第32回日本分子生物学会年会
  2009年12月09日, ポスター発表
• ピンポイントPEG化修飾操作を導入した二重特異性抗体巻き戻し技法
  第82回日本生化学会大会
  2009年10月24日, その他
• 低分子自己クラスター化がん治療抗体の創製と精密機能解析
  第82回日本生化学会大会
  2009年10月24日, その他
• I-125標識ヒト化二重特異性低分子抗体Ex3の動態評価
  第49回日本核医学会学術総会
  2009年10月02日, その他
• 低分子治療抗体の新規調製法の開発
  第61回日本生物工学会大会
  2009年09月24日, その他
• タンパク質工学に基づく組換え型がん治療抗体の開発
  第十回文部科学省特定領域研究「がん」5領域 若手研究者ワークショップ
  2009年09月02日, その他
• 会合ペプチドユニットによる低分子抗体アセンブリ技術とその応用
  第9回日本蛋白質科学会年会
  2009年05月22日, ポスター発表
• 市販抗体医薬を凌駕する低分子自己クラスター化抗体の創製
  第9回日本蛋白質科学会年会
  2009年05月22日, ポスター発表
• Highly effective recombinant formats of humanized bispecific antibody for cancer immunotherapy
  HOKKAIDO UNIVERSITY MAHIDOL UNIVERSITY Joint Symposium
  2009年05月13日, 口頭発表（招待・特別）
• 低分子抗体の多価化設計と物理化学的相互作用解析
  BMB2008 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会
  2008年12月09日, ポスター発表
• tandem scFv型二重特異性抗体の巻き戻しによる調製法の検討
  BMB2008 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会
  2008年12月09日, ポスター発表
• 低分子抗体巻き戻しプロセスへのPEG修飾操作の導入：効率的巻き戻し・タンパク質安定化・体内動態向上を目指して
  BMB2008 第31回日本分子生物学会年会・第81回c大会 合同大会
  2008年12月09日, その他
• 低分子二重特異性抗体の新規調製法の開発
  BMB2008 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会
  2008年12月09日, その他
• 抗EGFR一本鎖抗体の多量体化とがん治療に向けた機能評価
  BMB2008 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会
  2008年12月09日, ポスター発表
• がん免疫療法に向けたEGFRとCD3を標的としたヒト型化IgG様二重特異性抗体の有効性
  第67回日本癌学会学術総会
  2008年10月29日, その他
• 動物細胞を用いた高機能性組換え型治療抗体の調製と機能評価
  第60回日本生物工学会大会
  2008年08月28日, その他
• 第12回基盤的癌免疫研究会総会
  FGFR1抗体と二重特異性抗体
  2008年07月02日, ポスター発表
• 低分子抗体の巻き戻し中間体におけるPEG修飾
  第8回日本蛋白質科学会年会
  2008年06月12日, ポスター発表
• ヒト由来自己組織化ペプチドを利用した分子会合制御による低分子抗体の高機能化
  第8回日本蛋白質科学会年会
  2008年06月11日, ポスター発表
• 低分子二重特異性抗体の高活性クラスター構造解析
  第8回日本蛋白質科学会年会
  2008年06月11日, ポスター発表
• ヒト型化IgG様二重特異性抗体の高機能化に向けた検討
  第5回東北大学バイオサイエンスシンポジウム
  2008年05月19日, ポスター発表
• ファージ提示法を用いたがん関連抗原特異抗体の親和性向上
  第5回東北大学バイオサイエンスシンポジウム
  2008年05月19日, ポスター発表
• EGFR標的ヒト型化二重特異性抗体のセツキシマブとの比較検討
  第108回日本外科学会定期学術集会
  2008年05月16日, ポスター発表
• 有機ポリマー特異的抗体を利用したナノ粒子機能化
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月14日, その他
• EGFRとCD3を標的とした高機能な二重特異性抗体の形態
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月11日, その他
• がん治療を目指したIgG様二重特異性抗体の高機能化
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月11日, その他
• 抗CD16抗体可変領域を基盤とした二重特異性低分子抗体のヒト型化
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月11日, その他
• 自己組織化能を有する生体分子を用いた低分子抗体の高機能化
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月11日, その他
• ファージ提示法を用いた高親和性EGFR特異的抗体の選択
  BMB2007 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
  2007年12月11日, その他
• Efficacy of Humanized IgG-like Bispecific Antibody Formats in Cancer Immunotherapy
  Antibodies –Europe Engineering the Next Generation of Antibodies
  2007年11月07日, ポスター発表
• Affinity Maturation of the Humanized Anti-EGFR Antibody Fragment by Phage Display
  Antibodies –Europe Engineering the Next Generation of Antibodies
  2007年11月07日, ポスター発表
• 走査型電気化学顕微鏡(SECM)を用いた細胞表面受容体のイメージング
  第22回生体機能関連化学シンポジウム 若手フォーラム
  2007年09月30日, ポスター発表
• 生体分子の自己組織化能を利用した低分子抗体の高機能化
  第22回生体機能関連化学シンポジウム
  2007年09月29日, ポスター発表
• 走査型電気化学顕微鏡(SECM)を用いた細胞表面受容体のイメージング
  第22回生体機能関連化学シンポジウム
  2007年09月28日, ポスター発表
• がん治療薬を目指した組換え型二重特異性抗体の高機能化の検討
  第22回生体機能関連化学シンポジウム
  2007年09月28日, ポスター発表
• 抗CD16抗体可変領域に基づく低分子抗体の構築とそのヒト型化の試み
  第22回生体機能関連化学シンポジウム
  2007年09月28日, ポスター発表
• 生分解性プラスチック結合抗体を利用したナノ粒子機能化とバイオパターニング
  第7回日本蛋白質科学会年会
  2007年05月26日, ポスター発表
• ペプチド移植と生体外選択手法を連動した高親和性無機材料抗体の取得
  第7回日本蛋白質科学会年会
  2007年05月26日, ポスター発表
• ジスルフィド安定化diabodyの構築に向けた検討
  第7回日本蛋白質科学会年会
  2007年05月26日, ポスター発表
• tandem scFv型二重特異性抗体の大腸菌発現系を用いた調製と機能評価
  第7回日本蛋白質科学会年会
  2007年05月26日, ポスター発表
• 結晶構造に基づく抗EGFR抗体528のヒト型化に関する考察
  第7回日本蛋白質科学会年会
  2007年05月26日, ポスター発表

外部研究資金等

• 細胞・マウスモデルによる活性評価、ブレビバチルスによる蛋白質発現
  受託研究, 自 2021年04月01日, 至 2022年03月31日
• 光遺伝子/タンパク質工学・DDS・分子イメージングを駆使した次世代抗体療法の開発
  受託研究, 自 2021年04月01日, 至 2022年03月31日
• DDS・ナノバイオテクノロジーに基づく次世代抗体医薬および精密な質量分析法の開発研究
  受託研究, 自 2021年04月01日, 至 2022年03月31日
• 次世代バイオ医薬品の開発促進に資するブレビバチルス菌表層提示法の開発
  奨学寄附金, 自 2021年, 至 2021年
• 光遺伝子/タンパク質工学・DDS・分子イメージングを駆使した次世代抗体療法の開発
  受託研究, 自 2020年06月19日, 至 2021年03月31日
• 細胞・マウスモデルによる活性評価、ブレビバチルスによる蛋白質発現
  受託研究, 自 2020年06月01日, 至 2021年03月31日
• DDS・ナノバイオテクノロジーに基づく次世代抗体医薬および精密な質量分析法の開発研究
  受託研究, 自 2020年05月01日, 至 2021年03月31日
• バイオ医薬品の高度製造技術の開発/高性能な国産細胞株の構築（非天然型構造体の高度化と生産技術開発）
  受託研究, 自 2020年04月01日, 至 2021年02月28日
• 次世代バイオ医薬品の開発促進に資するブレビバチルス菌表層提示法の開発
  奨学寄附金, 自 2020年, 至 2020年
• 酸化還元酵素融合低分子抗体を用いた次世代型電気化学イムノセンサーの開発
  奨学寄附金, 自 2020年, 至 2020年
• 次世代がん治療薬を指向した低分子二重特異性抗体の機能的な構造の理解
  奨学寄附金, 自 2020年, 至 2020年
• グルコース脱水素酵素のスプリット化に基づく新規電気化学イムノセンサ素子の開発
  奨学寄附金, 自 2020年, 至 2020年
• DDS・分子イメージング・抗体工学を駆使した革新的Bispecific antibodyの開発
  受託研究, 自 2019年04月01日, 至 2020年03月31日
• 高性能な国産細胞株の構築（非天然型構造体の高度化と生産技術開発）
  受託研究, 自 2019年04月01日, 至 2020年02月28日
• 医療応用促進に向けた一本鎖抗体に特異的かつ汎用的に結合する核酸アプタマーの開発
  奨学寄附金, 自 2019年, 至 2019年
• バイオ医薬品の次世代製造宿主を指向した光発現誘導システム導入ブレビバチルス菌の創製
  奨学寄附金, 自 2019年, 至 2019年
• 低分子抗体と酸化還元酵素を駆使した次世代型電気化学イムノセンサーの開発
  奨学寄附金, 自 2019年, 至 2019年
• DDS・分子イメージング情報を活用した抗体工学に基づいたBsAbの開発
  受託研究, 自 2018年12月, 至 2019年03月
• 高性能な国産細胞株の構築（非天然型構造体の高度化と生産技術開発）
  受託研究, 自 2018年05月, 至 2019年02月
• 次世代バイオ医薬品を目指した低分子二重特異性抗体の基盤技術開発
  受託研究, 自 2018年04月, 至 2019年03月
• シアノバクテリアを用いた次世代低分子抗体医薬の生産
  奨学寄附金, 自 2018年, 至 2018年
• 次世代バイオ医薬品を目指した低分子二重特異性抗体の基盤技術開発
  受託研究, 自 2017年04月, 至 2018年03月
• 生産細胞構築技術の開発（非天然型構造生産に関わる高度化・高品質化技術開発）
  受託研究, 自 2017年04月, 至 2018年02月
• 臨床腫瘍特異的なシングルドメイン抗体機能複合体の取得技術に関する研究
  受託研究, 自 2016年10月01日, 至 2017年03月31日
• 多重特異性抗体の調製技術の移転
  受託研究, 自 2016年04月25日, 至 2016年09月30日
• 次世代バイオ医薬品を目指した低分子二重特異性抗体の基盤技術開発
  受託研究, 自 2016年04月01日, 至 2017年03月31日
• 生産細胞構築技術の開発（非天然型構造生産に関わる高度化・高品質化開発）
  受託研究, 自 2016年04月01日, 至 2017年02月28日
• 多重特異性抗体の調製技術の移転
  受託研究, 自 2015年11月16日, 至 2016年03月31日
• 多重特異性抗体の調製技術の移転
  受託研究, 自 2015年11月01日, 至 2016年03月31日
• 次世代バイオ医薬品を目指した低分子二重特異性抗体の基盤技術開発
  受託研究, 自 2015年10月01日, 至 2016年03月31日
• 生産細胞構築技術の開発（非天然型構造生産に関わる高度化・高品質化開発２）
  受託研究, 自 2015年09月29日, 至 2016年02月29日

委員歴

• 電気化学会
  The 68th Special Feature of Electrochemistry, Guest Editor
  自 202304, 至 202402
• 公益財団法人日本応用酵素協会
  選考委員
  自 202301, 至 202412
• 公益社団法人 電気化学会
  電気化学会編集委員会（電気化学誌担当）委員
  自 202303, 至 202503
• 国立研究開発法人 新エネルギー・産業技術総合開発機構
  分野横断的公募事業提案書等の書面審査員
  自 202212, 至 202403
• 独立行政法人日本学術振興会
  特別研究員等審査会専門委員、卓越研究員候補者選考委員会書面審査員及び国際事業委員会書面審査員・書面評価員
  自 202207, 至 202306
• 日本生化学会
  Journal of Biochemistry, Associate Editor
  自 202201, 至 202403
• 酵素工学研究会
  幹事
  自 201901, 至 202403
• 電気化学会
  生物工学研究会 運営委員
  自 202104, 至 202403
• 日本生化学会
  JB編集委員会編集参与(Advisory Board)
  自 201804, 至 201912
• 日本生物工学会
  JBB編集委員
  自 201706, 至 202105
• 国立研究開発法人日本医療研究開発機構・再生医療の産業化に向けた評価基盤技術開発事業（再生医療の産業化に向けた細胞製造・加工システムの開発）
  平成28年度課題評価委員
  自 201611, 至 201903

メディア報道

• 東京工科大、ゲノムDNA中の各種修飾塩基を測定する発光タンパク質構築法を開発?がんなどの簡易診断への応用に期待?
  東京工科大学応用生物学部の吉田亘准教授、東京農工大学大学院工学研究院の浅野竜太郎教授らの研究グループは、がんなどのバイオマーカーとしての利用が期待される、ゲノムDNA中の種々の修飾塩基を簡便に検出できる発光タンパク質の構築法を開発したと紹介される。
  日本経済新聞／日経バイオテク／マイナビニュース
  自 2023年02月08日, 至 2023年02月08日
• がんゲノムDNA中の修飾塩基の異常、室温での簡易測定方法を開発－東京工科大ほか
  この研究は、東京工科大応用生物学部の吉田亘准教授、東京農工大学大学院工学研究院の浅野竜太郎教授らの研究グループによるものと紹介される。
  QLifePro
  自 2023年02月09日, 至 2023年02月09日
• 微生物で「抗体医薬」安く がんなどの診断・治療　東京農工大など、生産コスト10分の1に　ほか
  東京農工大の浅野竜太郎准教授と米ノースカロライナ大学の早出広司卓越教授が、光合成をする微小な藻「シアノバクテリア」に抗体を作らせる研究を行っていることが紹介される。
  日本経済新聞／WEB
  自 2019年01月19日, 至 2019年01月21日
• Group led by Tokyo University of Technology construct luminescent proteins that enable simple detection method of various modified bases
  A research group led by Associate Professor Wataru Yoshida of the School of Bioscience and Biotechnology, Tokyo University of Technology, and Professor Ryutaro Asano of the Institute of Engineering, Tokyo University of Agriculture and Technology, has developed a method for constructing luminescent proteins that can easily detect various modified bases in genomic DNA, which is anticipated to be used as a biomarker for cancer and other diseases.
  Science Japan
  自 2023年04月05日, 至 2023年04月05日

所属学協会

• 日本生物工学会
• 日本蛋白質科学会
• 日本分子生物学会
• 酵素工学研究会
• 電気化学会
• 日本生化学会
• 日本癌学会
• 日本DDS学会

受賞

• 東京農工大学
  学長賞
  2019年10月
• 日本生化学会
  平成27年度日本生化学会奨励賞
  人工抗体の機能的構造形態に関する研究
  2015年12月03日
• 日本生物工学会
  第23回生物工学論文賞
  Trehalose suppresses antibody aggregation during the culture of Chinese hamster ovary cells
  2015年10月26日
• 日本生化学会東北支部
  平成26年度日本生化学会東北支部奨励賞
  多角的視点からの低分子二重特異性がん治療抗体の高機能化デザイン
  2014年05月10日
• 第84回日本生化学会大会
  鈴木紘一メモリアル賞
  低分子二重特異性抗体の機能的構造形態に関する実験的考察
  2011年09月23日
• 日本生化学会東北支部
  平成23年度日本生化学会東北支部優秀論文賞
  Highly Enhanced Cytotoxicity of a Dimeric Bispecific Diabody, the hEx3 Tetrabody
  2011年07月23日
• 財団法人インテリジェント･コスモス学術振興財団
  第10回インテリジェント・コスモス奨励賞
  次世代型がん治療薬を目指す低分子抗体の多量体化戦略
  2011年05月16日
• 財団法人青葉工学振興会
  第15回青葉工学研究奨励賞
  高機能性がん治療抗体のタンパク質工学的創製
  2010年01月23日
• 財団法人トーキン科学技術振興財団
  第19回研究奨励賞
  タンパク質工学を駆使した高機能性治療抗体の創製
  2009年03月17日